韩 丹，童亚楠，贾银平，唐梦灵，曹刘素，张竹君，潘 渠

(1.成都医学院 病原生物学教研室， 四川 成都 610500；2.陆军军医大学(第三军医大学) 医学检验系临床微生物及免疫学教研室， 重庆 400038)

结直肠癌(colorectal cancer，CRC)是全球第三大癌位居癌相关死亡原因的第二。肿瘤的复发且发生转移是导致治疗失败和死亡的主要原因[1- 2]。大量研究证实长链非编码 RNA(long non-coding RNA，lncRNA)在肿瘤的发生发展、侵袭和转移的过程里发挥了十分重要的作用。其中长度为379 bp，位于人 6 号染色体的lncRNA EVADR 是与结直肠癌有密切相关性的 lncRNA。值得注意的是 EVADR 的高表达提示预后不良，其表达水平与结直肠癌患者生存时间呈负相关[3]。而 lncRNA EVADR 在结直肠癌发生发展中的作用及调控机制目前尚不清楚。因此，本研究构建过表达 EVADR 的结直肠癌细胞通过利用慢病毒技术，观察其对结直肠癌细胞增殖和迁移能力的影响，并通过实验研究其对上皮间质转化(epithelial to mesenchymal transition，EMT)及参与调节分子表达的影响，深入探讨结直肠癌细胞增殖及转移中 EVADR 的潜在作用机制，为结直肠癌的早期诊断和治疗提供科学理论和实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂：慢病毒表达载体的构建和包装(上海汉恒生物科技有限公司)；嘌呤霉素；DMEM培养基、胎牛血清和胰蛋白酶(Gibco公司)；Primer Script RT Reagent Kit (TaKaRa公司)；SYBR-GREEN Real-time PCR MIX (Toyobo公司)；Trizol(Invitrogen公司)； ECL Western blot substrate (Pierce公司)；PVDF 膜(GE公司)；兔抗 E-cadherin (24E10) 和兔抗 β-actin(Cell Signaling公司)；HRP 标记的山羊抗兔抗体(北京中杉金桥生物技术公司)；Transwell小室(BD 公司)；CCK- 8试剂盒(东仁化学科技有限公司)。

1.1.2 细胞：人结直肠癌细胞系 HCT116 和 LOVO(中国科学院上海细胞库)。

1.2 方法

1.2.1 HCT116和LOVO 细胞的培养与慢病毒感染：人结直肠癌 HCT116和LOVO细胞培养环境为含10%胎牛血清的DMEM培养基，37 ℃、5% CO2培养。……