许天委，郝慧华，吴小霞，李国寅

(琼台师范学院 数理系，海南 海口 571127)

近年来，海南省高尔夫球场草坪建植已经进入突飞猛进的阶段，草坪养护管理水平不断提升，但由于高尔夫球场草坪种植密度大，草种单一，管理过程高度人工化，草坪容易发生病害[1-5]。目前，针对全国高尔夫球场草坪病害的研究报道不多，且主要研究冷季型草坪的病害，而专门针对海南省高尔夫球场草坪病害的研究则更少。2004年，刘晓妹等[6]对海南草坪草病害进行了简单报道。Zhang等[7-8]在2012年、2013年分别报道了红丝病危害海南省高尔夫球场海滨雀稗草坪及粉斑病危害果岭杂交狗牙根草坪。为进一步研究海南省高尔夫球场草坪病害及其防治措施，自2014年以来，对海南省海口、三亚、万宁、儋州和东方的高尔夫球场及练习场草坪进行真菌病害的系统调查，并测定6种杀菌剂对病原菌的室内毒力及防控效果，以期为海南省高尔夫球场提高养护管理水平、防控真菌病害提供理论依据。

1 材料和方法

1.1 调查时间和地点

从 2014 年 5月开始调查，至 2016 年 5 月结束，历时2 a。调查地点分别为海口美兰高尔夫球场、三亚红峡谷高尔夫球场、万宁康乐园高尔夫球场、儋州古盐田高尔夫球场、东方海航牧歌高尔夫球场、琼台师范学院高尔夫练习场。每个高尔夫球场随机选取3～6个球洞，分别对其发球台、果岭、球道区域的真菌病害进行调查，确定危害部位及程度。调查的草种主要有海滨雀稗(PaspalumvaginatiumSw)、杂交狗牙根[Cynodondactylon(Linn.)]。

1.2 病害调查方法

参考《植病研究方法》[9]进行调查， 整个调查过程中，采取踏查与重点调查相结合的方式，对调查到的病害拍照、记录症状、采集标本。

1.3 病原菌的分离和鉴定

真菌病害病原菌分离所用培养基为PDA培养基[10]，对分离到的病原菌进行纯培养后再做进一步的鉴定[11-14]。

1.4 病害防治试验

1.4.1 供试药剂 包括70%甲基托布津WP(江苏龙灯化学有限公司)、40%五氯硝基苯WP(山西临汾有机化工厂)、70%代森锰锌WP(四川国光农化有限公司)、75%福美双WP(河北冀丰农药化工有限公司)、50%多灵菌WP(河南孟州平原农药厂)、15%粉锈宁WP(四川国光农化有限公司)。

1.4.2 药剂的室内毒力测定 采用生长速率法[9]。先用无菌水把每一种药剂配成1、10、50、100、200 μg/mL 5个不同质量浓度的药液。在9 mL的熔融状态PDA培养基中加入1 mL药液制成含药培养基平板,用直径为0.7 cm的打孔器取已培养4 d的菌落边缘菌丝块，接种到不同质量浓度的含药培养基平板中央，于27～29 ℃下培养48 h。同时,在9 mL培养基中加入1 mL无菌水并接入菌丝块作为对照。用十字交叉法测量菌落直径，通过净生长量计算相对抑制率，求出6种药剂对11种病害病原菌的毒力回归方程[9]和半数有效质量浓度(EC50)，比较不同药剂的抑制效果。

计算公式:

相对抑制率=

1.4.3 球场草坪病害的防治 试验地为东方海航牧歌高尔夫球场,草坪草种为海滨雀稗。各药剂使用时稀释倍数分别为甲基托布津600倍、五氯硝基苯500倍、代森锰锌1 200倍、福美双600倍、多灵菌600倍、粉锈宁1 000倍。以喷雾的方式在球道进行施药,每种药剂施药面积为667 m2，施液量为45 kg，设3个重复，以清水为对照,各试验区四周设保护。施药时间为2016年7月，每隔7 d喷药1次,共喷药3次。在第3次喷药后20 d 进行调查，采用5点取样[9],每点调查100株草,根据不同病害在海滨雀稗草不同部位的危害表现，统计病情指数，评价防治效果[15-16]。

根部病害分级标准：0级，健根；1级，根部坏死面积占根总面积的0.1%～10%；2级，根部坏死面积占根总面积的11%～25%；3级，根部坏死面积占根总面积的26%～50%；4级，根部坏死面积占根总面积的51%～75%；5级，根部坏死面积占根总面积的76%～100%。叶部病害分级标准：0级，全叶无病斑；1级，叶片仅现小斑点,病斑面积在5%以下；2级，叶部的病斑面积占整叶的6%～15%；3级，叶部的病斑面积占整叶的16%～30%；4级，叶部的病斑面积占整叶的31%～50%；5级，叶部的病斑面积占整叶的51%以上。

1.5 数据分析

采用DPS 7.05统计软件进行数据的处理与分析。

2 结果与分析

2.1 不同球场真菌病害种类统计

2.1.1 海口美兰高尔夫球场草坪真菌病害分布 海口美兰高尔夫球场主要种植草坪草为海滨雀稗和杂交狗牙根，共有真菌病害6种(表1)。其中，对草坪叶片危害为重度的有币斑病、镰刀菌枯萎病、炭疽病；对根部危害为重度的有全蚀病、镰刀菌枯萎病、仙环病；对茎危害为重度的有镰刀菌枯萎病。

表1 海口美兰高尔夫球场草坪真菌病害分布情况

注：病害的危害程度中，+表示轻度，++表示中度，+++表示重度，下同。

2.1.2 三亚红峡谷高尔夫球场草坪真菌病害分布 三亚红峡谷高尔夫球场主要功能区发球台、球道和果岭种植草坪草均为海滨雀稗。在发球台和球道上均有镰刀菌枯萎病，该病对海滨雀稗的根、茎、叶均有危害，危害程度为重度(表2)。在8种病害中，全蚀病只对海滨雀稗的根部产生危害，危害程度为重度；币斑病、黑痣病、条锈病及炭疽病只对海滨雀稗草的叶片产生危害，在发球台上，币斑病对海滨雀稗草叶片的危害程度为中度，而在果岭上对海滨雀稗草叶片的危害程度为重度；仙环病对海滨雀稗草根和茎的危害程度均为中度。

表2 三亚红峡谷高尔夫球场草坪真菌病害分布情况

2.1.3 万宁康乐园高尔夫球场草坪真菌病害分布 调查结果表明，康乐园高尔夫球场发球台和球道种植的草坪草为杂交狗牙根，果岭为海滨雀稗。根据表3，发球台和球道均有镰刀菌枯萎病，其在杂交狗牙根草根、茎、叶上的危害程度均为重度。在该球场的主要功能区共调查到7种病害，其中6种病害对叶片都有危害，程度均为重度。仙环病只发生在种植杂交狗牙根草种的球道上，危害草坪的部位为根和茎，程度为重度。

表3 万宁康乐园高尔夫球场草坪真菌病害分布情况

2.1.4 儋州古盐田高尔夫球场草坪真菌病害分布 调查结果表明，古盐田高尔夫球场发球台和球道种植的草坪草为杂交狗牙根，果岭种植的草坪草为海滨雀稗。调查发现，杂交狗牙根草坪上发生的病害有8种，对叶片危害为重度的有镰刀菌枯萎病、黑孢霉枯萎病、粉斑病、炭疽病；全蚀病只对杂交狗牙根草的根有危害，程度为中度(表4)。在海滨雀稗草坪中发现3种病害，分别是全蚀病、币斑病和炭疽病，其中炭疽病的危害程度为重度，其余的危害程度均为中度。

表4 儋州古盐田高尔夫球场草坪真菌病害分布情况

2.1.5 东方海航牧歌高尔夫球场草坪真菌病害分布 东方海航牧歌高尔夫球场发球台种植的草坪草为杂交狗牙根，球道和果岭种植的草坪草为海滨雀稗。根据表5，该球场真菌病害有7种，只有仙环病对海滨雀稗草坪根系的危害程度为重度，其他病害对根系的危害程度为中度，同时镰刀菌枯萎病对海滨雀稗草坪和杂交狗牙根草坪的根、茎、叶均有危害，其中对叶片的危害程度为重度，对根和茎的危害程度均为中度。

表5 东方海航牧歌高尔夫球场草坪真菌病害分布情况

2.1.6 琼台师范学院练习场草坪真菌病害分布 据调查，琼台师范学院练习场种植草坪草为海滨雀稗，病害有4种(表6)。全蚀病只危害根部，危害程度为中度；币斑病和炭疽病危害部位均为叶片，危害程度分别是中度和重度；镰刀菌枯萎病则对海滨雀稗草坪的根、茎、叶都有危害，其中对根和茎的危害程度为中度，对叶片的危害程度为重度。

表6 琼台师范学院练习场草坪真菌病害分布情况

2.2 化学药剂室内毒力测定结果

通过对1个高尔夫练习场和5个高尔夫球场的发球台、球道和果岭进行病害调查，在海滨雀稗草坪和杂交狗牙根草坪上共发现11种真菌病害，因此，分别测定6种药剂对这11种病原菌的室内毒力。

2.2.1 甲基托布津对不同病原菌生长的抑制情况 从表7可以看出，甲基托布津对11种病菌的EC50值均小于15 μg/mL，其中最小值为镰刀菌枯萎病菌0.02 μg/mL，最大值为褐斑病菌12.80 μg/mL，说明其对不同病原菌的生长抑制作用明显。甲基托布津对病菌EC50值小于0.1 μg/mL的有镰刀菌枯萎病菌0.02 μg/mL和全蚀病菌0.09 μg/mL，EC50值大于0.1 μg/mL且小于1 μg/mL的有币斑病菌0.13 μg/mL和仙环病菌0.55 μg/mL。

表7 甲基托布津对不同病原菌生长的抑制情况

2.2.2 五氯硝基苯对不同病原菌生长的抑制情况 根据表8的测定结果，五氯硝基苯对11种不同病原菌生长抑制作用的EC50值由小到大依次为镰刀菌枯萎病菌、全蚀病菌、币斑病菌、红丝病菌、炭疽病菌、仙环病菌、条锈病菌、褐斑病菌、黑孢霉枯萎病菌、黑痣病菌、粉斑病菌，最小值为镰刀菌枯萎病菌0.08 μg/mL，最大值为粉斑病菌51.61 μg/mL。

表8 五氯硝基苯对不同病原菌生长的抑制情况

2.2.3 代森锰锌对不同病原菌生长的抑制情况 根据表9，代森锰锌对11种病菌的生长都有抑制作用。该药剂对不同病菌的毒力由大到小依次为仙环病菌、炭疽病菌、币斑病菌、红丝病菌、黑孢霉枯萎病菌、全蚀病菌、镰刀菌枯萎病菌、条锈病菌、褐斑病菌、黑痣病菌、粉斑病菌。EC50值大于50 μg/mL的有黑痣病菌51.81 μg/mL和粉斑病菌52.23 μg/mL，其余的EC50值都小于10 μg/mL，最小的为仙环病菌0.10 μg/mL。

2.2.4 福美双对不同病原菌生长的抑制情况 由表10的测定结果可知，药剂福美双对11种病菌的EC50值最小值为炭疽病菌0.37 μg/mL，最高值为粉斑病菌30.12 μg/mL。该药剂对11种病菌的生长均有一定的抑制作用，EC50值由小到大依次为炭疽病菌、币斑病菌、镰刀菌枯萎病菌、仙环病菌、条锈病菌、黑孢霉枯萎病菌、红丝病菌、黑痣病菌、全蚀病菌、褐斑病菌、粉斑病菌。

表10 福美双对不同病原菌生长的抑制情况

2.2.5 多菌灵对不同病原菌生长的抑制情况 根据表11，多菌灵对高尔夫球场草坪上11种病菌的生长都有一定的抑制作用，EC50值最低的为红丝病菌0.93 μg/mL，最高的为条锈病菌11.53 μg/mL。多菌灵对11种病菌的毒力由大到小依次为红丝病菌、镰刀菌枯萎病菌、全蚀病菌、黑痣病菌、炭疽病菌、币斑病菌、黑孢霉枯萎病菌、褐斑病菌、仙环病菌、粉斑病菌、条锈病菌。

表11 多菌灵对不同病原菌生长的抑制情况

2.2.6 粉锈宁对不同病原菌生长的抑制情况 根据表12的测定结果可知，粉锈宁对11种病菌生长的抑制效果差异较大，EC50值最小值为0.06 μg/mL，最大值为320.13 μg/mL。其中，EC50值高于100 μg/mL的有黑痣病菌182.03 μg/mL和红丝病菌320.13 μg/mL，粉锈宁对这2种病菌的毒力较小。EC50值小于5 μg/mL的有粉斑病菌0.06 μg/mL和褐斑病菌4.63 μg/mL，粉锈宁对这2种病菌的毒力较大。

表12 粉锈宁对不同病原菌生长的抑制情况

2.3 化学药剂对病害的防治效果

从表13可以看出，各药剂处理与对照的病情指数存在显著差异。防治效果最好的是甲基托布津，达到66.0%；其次是五氯硝基苯，防治效果达57.6%；代森锰锌防治效果为52.2%；粉锈宁防治效果最差，为34.3%。除代森锰锌与福美双的防治效果差异不显著外，其余各处理之间均存在显著差异。

表13 不同药剂对高尔夫球场真菌病害防治效果

注：同行不同字母表示差异显著(P<0.05)。

3 结论与讨论

通过调查发现，目前海南省高尔夫球场种植的草坪草主要有海滨雀稗和杂交狗牙根。从对球场的发球台、球道及果岭病害调查结果来看，危害海滨雀稗和杂交狗牙根草坪的病害共有11种，分别为币斑病、镰刀菌枯萎病、全蚀病、仙环病、条锈病、炭疽病、褐斑病、黑痣病、粉斑病、红丝病、黑孢霉枯萎病,病害种类及病原菌与前人报道基本一致[6，17]。

经调查发现，万宁康乐园高尔夫球场球道上的杂交狗牙根草坪有粉斑病，果岭上的海滨雀稗草坪有红丝病，而儋州古盐田高尔夫球场、东方海航牧歌高尔夫球场也有粉斑病，与Zhang等[18]认为这2种病害在海南省广泛分布相一致，其曾被认为是世界范围内冷季型、暖季型草坪的常见病害[19]。根据对6个球场和练习场的病害调查，黑孢霉枯萎病只在儋州古盐田高尔夫球场发球台上发现，可能与该球场草坪草种单一、草坪种植时间短、调查期间的气候特点有关。

根据药剂对不同病原菌生长的毒力测定结果，6种药剂对11种真菌病害病原菌的生长均具有一定的抑制效果。甲基托布津和五氯硝基苯对镰刀菌枯萎病病原菌的抑制作用最强，EC50分别为0.02 μg/mL和0.08 μg/mL；代森锰锌对仙环病病原菌的抑制作用最强，EC50为0.10 μg/mL；福美双对炭疽病病原菌的抑制作用最强，EC50为0.37 μg/mL；多菌灵对红丝病病原菌的抑制作用最强，EC50为0.93 μg/mL；粉锈宁对粉斑病病原菌的抑制作用最强，EC50为0.06 μg/mL。同时球场防治试验结果显示,甲基托布津对草坪病害的防治效果最好,达66.0%,值得在球场管理上推广应用；另外,五氯硝基苯和代森锰锌也有一定的防治效果,分别为57.6%和52.2%。为了避免病菌抗药性的产生,在球场草坪养护过程中，可将上述几种药物交替使用或混合使用。

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