向奋飞

（成都市龙泉驿区疾病预防控制中心 四川 成都 610100）

随着社会的不断发展，饮料的种类不断增多，在食品安全备受关注的今天，对甜味剂和防腐剂使用情况的重视程度与日俱增。碳酸饮料中，甜味剂与防腐剂常常同时存在，并且具有较多的检测方法较，其中应用较为普遍的有气相色谱、高效液相色谱、分光广度及离子色谱等方法[1]。由于甜蜜素的结构中无生色团，紫外区内甜蜜素无吸收，所以不能直接运用检测设备进行检测，通常采用高效液相色谱方法对其衍生后的物质进行分析，步骤比较繁琐，测定周期大大增加，其中样品衍生效率直接决定着结果准确度[2]。因此，本次研究通过示差折光式检测设备与高效液相色谱方法相结合，直接对饮料中所含糖精钠、山梨酸以及苯甲酸实施测定。试样预处理过程比较简单，具有较快的分析速度，能够在7min内实现以上添加剂的全部出峰，具有较高的分离效率，具有较高的灵敏度和重现性。现汇报如下。

1.试验材料

1.1 试验设备

本研所采用的试验设备由Waters公司生产的Waters2695高效液相色谱仪，同时配置有柱温箱、2412示差折光检测器；双重纯水自动式蒸馏器；超声波KH-100B清洗器。

1.2 试验试剂

苯甲酸、甲醇、糖精钠、山梨酸、甜蜜素等为分析纯。浓度为106g/L的亚铁氰化钾CrattzⅠ；浓度为220g/L的乙酸锌山梨酸CrattzⅡ；浓度为0.010mol/L的乙酸氨水溶液。试验前应当用0.45um滤膜进行处理。用双蒸水将苯甲酸钠、甜蜜素、糖精钠配制成1.000mg/ml的标准液，使用液应当结合实际需要进行配制。

饮料：可乐、龙井绿茶、康师傅冰红茶、王老吉凉茶。

1.3 色谱最佳条件

Novo-PaK C18柱色谱柱；流动相为浓度为0.01mol/L的乙酸铵水、甲醇；柱温、RID检测器均为30℃；等度洗脱；1.0ml/min的流速；64灵敏度；10.0ul进样量。

1.4 标准液配制

准备50.00ml容量瓶，分别将可乐、龙井绿茶、康师傅冰红茶、王老吉凉茶试样5.00g～10.00g装入其中，添加流动相少许，然后超声脱气，时间为10min，分别将试剂CrattzⅠ、Ⅱ各0.5ml加入其中，对流动相进行定容到既定刻度，摇晃均匀、然后再进行超声脱气，待10min后，提取5ml的上清液进行离心处理，转速400r/min，离心时间10min，最后用0.45um滤膜进行过滤。

2.结果与讨论

2.1 选择检测设备与检测波长

由于糖精钠、山梨酸、苯甲酸、甜蜜素等检均有紫外吸收现象[3]。因此检测时可选择紫外检测设备，通过程序的可变波长，测定各物质最佳的波长位置，获得更好的选择性和灵敏度，结果选定紫外波长230nm。

2.2 选择流动相的配比

流动相的洗脱能力及组分分离状况受其极性影响较大，但是流动相配比变化势必会引起其极性变化，流动相的配比的适当性可使峰形得到改善，分离效果提高[4]。对其他的试验条件进行固定，通过等度洗脱的方式，观察分析流动相配比对各组分的分离度所造成的影响。观察发现，在增加甲醇比例的情况下，会降低各组分分离程度。在3%～5%甲醇比例范围内，所有分离度不小于1.5，试验过程中为使试剂用量减少，使试验成本降低，可选择3:97的流动相配比。

2.3 选择乙酸铵的浓度

在碱性试样测定时，色谱峰经常出现脱尾，为减少这一现象的发生，在流相中适当加入乙酸铵，分离效果大大提高。分别对乙酸铵0.001～0.030mol/L浓度范围内进行测定，测定规律为每隔0.010mol/L进行一次，对各样品分离情况进行考察，结果显示，加入0.10mol/L的乙酸铵时，各样品分离度＞1.5，此时各组分保持最大的峰面积和最高的灵敏度。

2.4 选择设置检测设备的灵敏度及流速

由于该试验所用折光检测设备的灵敏度不高，属于中等类型，其灵敏度严重受溶剂峰的影响。所以该实验分别对检测设备32、64、128、256的灵敏度设置时各个组分峰面积进行考察，实验结果显示，增加检测设备的灵敏度，所有峰面积大大增加，基线噪音也会不断增加。当灵敏度为128及256时，会逐渐增大溶剂的峰漂移，苯甲酸定量受到影响，因此测定时检测设备零度度应当设置为64。

由于流速是影响柱效、系统压力、洗脱时间以及分离效果的重要因素，流动相得到固定后，正确选择最短分析时间最佳流速。然后分别对0.5～0.8ml/min范围内的流速，每隔0.1ml/min进行一次流速测定，结果显示，不断增大流速，将会提前各组分保留时间，提高分析效率。但是较大的流速，较高的系统压力，则容易造成色谱柱被冲塌的现象。当流速保持0.7ml/min时，所有组分保持一致的保留时间，并且实现了基线分离，取得良好的分离效果和最短的分析时间。因此0.7ml/min为该试验最佳流速的选择标准。

2.5 干扰组分试验

可乐、龙井绿茶、康师傅冰红茶、王老吉凉茶等饮料中一般都含有VC、咖啡因等物质，色谱条件选定下，结果显示该两种组分对测定不会产生干扰。

2.6 绘制标准曲线

准确称取山梨酸、苯甲酸、甜蜜素以及糖精钠添加剂0.1g标准样，然后用甲醇溶解，并定容在100ml，进行适量溶液的量取，然后再进行稀释，制成标准液备用，进样量均为20ul，记录峰面积与色谱图，纵横坐标分别为各标准浓度与峰面积，在色谱条件最佳时，对标准曲线进行测定，其线性范围、相关系数、检出限如表1。

表1 标准曲线线性范围、检出限及回归方程

2.7 加标回收

加标试验时，将糖精钠、山梨酸、苯甲酸以及甜蜜素标准液添加到试样中，对其含量进行测定，并对回收率、精密度进行计算，结果如表2所示。

表2 精密度与回收率结果

2.8 测定实际试样

试样经处理后再用0.45um滤膜进行过滤，并将试样分为两组，其中可乐、龙井绿茶为试样1，康师傅冰红茶、王老吉凉茶为试样2，在色谱条件最佳状况下观察分析，其测定结果如表3。

表3 试样的测定结果（g/kg）

3.结论

本实验利用高效液相色谱方法，并结合示差折光检测设备，对可乐、龙井绿茶、康师傅冰红茶、王老吉凉茶等饮料中所含的糖精钠、山梨酸、苯甲酸、甜蜜素等进行测定，具有较高的准确度，简单便捷的操作程序及广泛的应用范围，精密度及线性关系良好，可对各类饮料中所含防腐剂及甜味剂进行同时检测，对于实验室常规检测分析非常适用。

[1]吴婕，杨柳.高效液相色谱法同时测定食品中防腐剂、甜味剂和色素[J].化学工程与装备，2010，2(10)：156-157.

[2]谭建林，冯雷，俸金梅，等.高效液相色谱法同时测定食品中12种防腐剂和甜味剂[J].食品安全质量检测学报，2016，7(10)：4101-4105.

[3]肖军，周牡娜，郭劲霞.高效液相色谱法同时测定乳及乳制品中防腐剂和甜味剂[J].中国科技博览，2015，3(47)：37-38.

[4]马康，蒋孝雄，赵敏，等.高效液相色谱法同时测定软饮料中20种食品添加剂[J].分析化学，2012，40(11)：1661-1667.