关秋竹，张 琼，孙红雁，周广芳，孙清荣

枣(Ziziphus jujube Mill.)组培繁殖通常选择茎尖、茎段、叶片、胚、花药等作为外植体，目前已有枣树品种20个以上以各种类型的外植体建立了无菌离体繁殖体系［1～4］。通过花药培养获得愈伤组织和再生植株，可以为遗传育种研究提供重要材料。枣的花药培养开始于20世纪90年代，最初仅在金丝小枣上有过报道［5］。随后研究者们对枣花药愈伤组织的诱导及分化进行了研究［6，7］，并成功获得了几个枣品种花药再生植株，如‘长红枣’和‘金丝小枣’再生植株［8］;‘辣椒枣’和‘月光’枣源于花药壁的再生植株［9］;‘冬枣’单倍体2 株［9］;‘赞皇大枣’单倍体1 株［10］。‘鲁枣2 号’和‘鲁枣6 号’是由山东省果树研究所选育的新品种［11，12］，其花药培养尚未见报道。为了更好地利用、保存和改良这些品种，本次研究以前人报道为基础，通过正交实验设计，旨在建立枣的离体花药植株再生体系，为枣花药离体培养研究和单倍体育种提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料

5月底至6月初，在山东省果树研究所枣树资源圃采集枣树新品种‘鲁枣2号’和‘鲁枣6号’绿色到黄绿色，且花萼尚未张开的幼嫩花蕾作为材料。

1.2 方法

1.2.1 花药愈伤组织的诱导 幼嫩花蕾置于4℃冰箱中1 d后，用流水冲洗0.5～1.0 h，控净水后置于超净工作台上的无菌烧杯内，用体积分数为0.70的酒精浸泡1 min，再用体积分数为0.05的次氯酸钠溶液杀菌15 min，无菌水冲洗3～4次后，剥取花药接种在愈伤组织诱导培养基上。愈伤组织诱导培养基采用MS，1/2 MS，1/4 MS培养基，附加葡萄糖、蔗糖、麦芽糖作为碳源(质量浓度均为30.0 g·L－1)，添加不同量的萘乙酸(NAA)及 2，4-二氯苯氧乙酸(2，4-D)。……