包书茵，韩淑英，朝日雅，澈力格尔，奥·乌力吉

(内蒙古民族大学1. 医学院药理教研室、2. 蒙医药学院制剂实验室、3. 蒙医药学院蒙医内科教研室，内蒙古 通辽 028000；4. 华北理工大学基础医学院药理学系，河北 唐山 063000)

2型糖尿病(T2DM)导致的肝、肾损伤是糖尿病常见并发症，也是糖尿病死亡的主要原因之一[1-2]，因此，预防及延缓T2DM并发症发生发展的研究及药物的开发备受人们关注。GK大鼠是自发性非肥胖型糖尿病动物模型[3]，与人类T2DM病程特点尤为相似[4]。本实验应用沙蓬粗寡糖(AOS)对GK大鼠进行干预，观察其对肝、肾的保护作用，为沙蓬进一步开发应用提供研究基础。

1 材料

1.1实验动物SPF级♂GK大鼠(上海斯莱克斯实验动物责任有限公司)；SPF级♂Wistar大鼠(北京华阜康生物科技股份有限公司)，均饲养于华北理工大学动物实验中心屏障实验室。

1.2药物与试剂AOS由内蒙古蒙医药工程技术研究院提供；NF-κB多克隆抗体(Santa Cruz公司)。

2 方法

2.1动物分组及给药65只GK大鼠，给予高脂饲料诱导5周后，挑选符合成模标准(随机血糖及糖耐量2 h血糖均高于11.1 mmol·L-1)的50只，随机分为5组，另设正常对照组(NC)，共6组，每组10只。二甲双胍组(ME)给药剂量为100 mg·kg-1；AOS高(AOS-H)、中(AOS-M)、低(AOS-L)剂量组给药剂量分别为960、480、240 mg·kg-1；模型对照组(MC)与NC每天灌胃同容积蒸馏水5 mL·kg-1，各组每天给药1次，连续8周。

2.2观察指标

2.2.1随机血糖(RBG) 分别于给药第0、2、4、6、8周用罗氏血糖仪测定非禁食血糖(上午8 ∶00给药后30 min)。

2.2.2血生化指标检测 给药8周后，禁食12 h，大鼠用10%水合氯醛腹腔注射麻醉，经腹主动脉取血并分离血清，用全自动生化分析仪测定血清中尿酸(UA)、尿素(Urea)、肌酐(Cre)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)。

2.2.3大鼠肝、肾组织HE染色病理观察 大鼠取血后，立即剖腹取肝、肾固定于4%多聚甲醛中，常规石蜡包埋，HE染色，于高倍显微镜下观察病理学改变。

2.2.4大鼠肝、肾组织免疫组化染色观察NF-κB蛋白表达 上述肝、肾石蜡包埋组织，切成3 μm防脱薄片，60℃烤箱过夜，常规免疫组化染色，显微镜下观察NF-κB蛋白表达情况。

3 结果

3.1AOS对GK大鼠RBG的影响MC大鼠RBG随着周龄增加逐渐升高；与MC比较，AOS各剂量组大鼠RBG明显降低(P<0.01)，但有波动现象，给药4周降低效果最好，以AOS-M效果更好，其降糖效应与ME相近。

3.2AOS对GK大鼠肝、肾功能的影响MC大鼠血清ALT、AST活性和Urea、Cre、UA含量明显高于NC(P<0.01，P<0.05)；与MC比较，AOS-H、AOS-M、AOS-L和ME的ALT活性明显降低(P<0.01)，AOS-L能明显降低血清AST活性，与ME一致。AOS能明显降低血清Cre和UA含量(P<0.01，P<0.05)；ME血清Urea含量明显低于MC(P<0.05)，各剂量AOS大鼠血清Urea含量与MC无显著性差异(Tab 1)。

Tab 1 Effect of AOS on ALT, AST, TBIL, Urea, Cre and UA of serum of GK rats(±s，n=10)

#P<0.05，##P<0.01vsnormal group;*P<0.05，**P<0.01vsmodel group

3.3AOS对GK大鼠肝、肾组织病理改变的影响肝脏HE染色结果显示，与NC相比，MC大鼠肝细胞索、肝窦结构紊乱，细胞脂肪变性，有炎症细胞浸润和出血点；ME与AOS各剂量组大鼠肝组织病理改变明显减轻，几乎接近正常。肾组织HE染色结果显示，与NC相比，MC大鼠肾小球基底膜弥漫性增厚，肾小球系膜增厚，动脉壁增厚，动脉、肾小球及间质周围出现淀粉样沉积，肾小管间质炎细胞浸润；AOS-H和AOS-L与MC相比明显减轻，但有少量炎细胞浸润，肾小球基底膜轻度增厚；AOS-M和ME趋于正常。

3.4AOS对GK大鼠肝、肾组织NF-κB蛋白表达的影响NC肝、肾组织只有少量散在的黄染颗粒，表明只有少量NF-κB蛋白表达，而MC肝、肾组织可见大量黄染颗粒，表明NF-κB蛋白表达明显增强，多为细胞质均匀表达，少量细胞核着色。AOS各剂量组NF-κB蛋白表达明显少于MC，AOS-H的NF-κB蛋白表达与ME相当。AOS对肝和肾组织NF-κB蛋白表达具有抑制作用。

4. 讨论

长期患有T2DM可导致肝、肾损伤等多种并发症。大量研究显示，炎症和免疫是糖尿病肝、肾损伤的重要发病机制之一，也是触发胰岛素抵抗和代谢疾病的相关因子。近年发现，应用炎症抑制剂或(和)NF-κB抑制剂能够明显改善胰岛素抵抗及其糖尿病并发症的发生、发展[5]。沙蓬是中国蒙医常用药材，具有清热、解毒、利尿等功能[6]。前期研究发现，AOS能改善胰岛素抵抗[7]。本研究也发现，在糖尿病MC组大鼠肝、肾组织NF-κB蛋白表达明显上调，AOS干预组能明显下调自发性T2DM GK大鼠肝、肾组织NF-κB蛋白表达，有剂量效应关系；同时，AOS能降低RBG，对糖尿病肝、肾损伤有良好抑制作用或延缓其病情进展作用。其作用机制可能是AOS抑制NF-κB蛋白表达，减少炎性细胞因子的生成，达到一定的抗炎作用[8]，从而发挥对肝、肾组织的保护作用，确切机制有待深入研究。

(致谢：本实验是在华北理工大学基础医学院、河北省慢性疾病重点实验室、唐山市慢性病临床基础研究重点实验室完成的，感谢课题组成员的支持与帮助!)

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