□ 周 斌 徐雪梅 白雯静 田妮娜 刘 荔 兰州市食品药品检验所

2017年某单位对全省包装饮用水的生产单位、销售单位的包装饮用水进行了监督抽检。共抽检602批次，不合格48批次，不合格率为8.0%，不合格的主要是大桶装的包装饮用水，不合格的主要项目是铜绿假单胞菌。铜绿假单胞菌通常会引起黏膜、伤口感染化脓。包装饮用水卫生的新国家标准GB 19298-2014，要求水样中不得检出铜绿假单胞菌。

包装饮用水中铜绿假单胞菌的检测是依据GB8538-2016，实验中要用的材料、仪器、方法如下。

1 材料与方法

1.1 样品

样品主要来源于省内的生产、销售单位，共计603批。

1.2 试剂和培养基

铜绿假单胞菌选择性CN 琼脂培养基、金氏B 琼脂养基、乙酰胺液体培养基、绿脓菌素测定用培养基、十六烷三甲基溴化铵琼脂、乙酰胺琼脂培养基、氧化酶试剂、营养琼脂、纳氏试剂。

1.3 仪器设备

生物安全柜、恒温培养箱、显微镜、膜过滤系统、全自动微生物鉴定及药敏分析系统（VITEK 2）和紫外仪。

1.4 方法

《食品安全国家标准饮用天然矿泉水检验方法》（GB 8538-2016）57中采用滤膜法，将250mL水样用孔径为0.45 μm的滤膜过滤，并将滤膜移至CN琼脂选择性培养基上，于（36±1）℃恒温箱中培养20～48h，典型菌落能够在CN琼脂选择性培养基上生长并产生绿脓菌素，或者能够在溴化十六烷基三甲基选择性培养基上生长并且氧化酶呈阳性、紫外光（360±20）nm照射下能发荧光，能够利用乙酰胺产氨的革兰氏阴性无芽孢杆菌，经证实为铜绿假单胞菌，则其检测结果为阳性。

2 结果

共抽检样品602份，检出铜绿假单胞菌的有48份，检出率达到8.0%，可见在桶装饮用水铜绿假单胞菌的检出率是相当高的。

3 检验过程中应注意的问题

第一，水样过滤完毕在贴滤膜的过程中一定要注意滤膜要平铺并避免在滤膜和培养基之间夹留气泡。若不注意留有气泡就会影响后期的判定，因为气泡在紫外灯下也会产生荧光，这样同产荧光的铜绿假单胞菌互相干扰，给后期的鉴定造成麻烦且会增加多余的工作量。

第二，培养时应将平板倒置于36℃的培养箱中培养，并防止干燥。

第三，培养时间也很重要，在20～24h时一定要观察是否长菌或者长菌的多少，若长菌要观察是否有可疑菌落，有可疑菌落就要挑取做下一步的实验。若等到培养40～48h再进行观察，菌长得多的平板上可疑菌就有可能会重叠或者菌落过分生长而出现菌落融合，不利于下一步的实验，有可能造成漏检或误判。

第四，在紫外线下检查滤膜时，应避免长时间在紫外光下照射，否则可能会将平板上的菌落杀灭，从而导致可疑菌无法在证实培养基上生长，造成目标菌的漏检。

4 污染控制探讨

铜绿假单胞菌是一种重要的水源性致病菌，广泛生存于各类型水中。GB 19298-2014规定每250mL水样中铜绿假单胞菌不得检出。由于随着社会的发展，人类对环境污染也屡有报道，进一步也影响到人们日常的生活用水，所以现在许多人选择饮用大包装的桶装水。但近年来包装饮用水中检出铜绿假单胞菌的通报也不是什么新鲜事，全国多地都有。对于饮用了被铜绿假单胞菌污染的水是否会损害健康，取决于水中铜绿假单胞菌含量和不合格水的饮用量。

第一，饮用桶装水的生产企业应在源头上杜绝水源的污染，首先做好水源水的检验，若水源水中检出铜绿假单胞菌应调差分析可能存在的污染，分析污染是有何种情况造成的，然后针对问题研究解决的方案。

第二，企业应加强对人员的培训，不断提高人员的专业技能和自身综合素质，使生产人员讲究卫生规范操作，以免人为的因素污染产品；同时企业也应重视硬件设施的更新和维护，生产的环境应符合相关的规定。

第三，食药监管部门应进一步加强生产企业的监管，尤其在夏季，环境的湿度大，温度也最适宜铜绿假单胞菌的生长（铜绿假单胞菌的最适生长温度是（36±1）℃，督促企业规范生产，做好日常检验或委托检验，食药监管部门和企业双管齐下相信包装饮用水的质量会越来越好。

消费者购买桶装水时选择品牌商的授权网点。饮用时，最好在一周内饮用完，开封一个月的桶装水最好煮沸后再饮用，避免滋生细菌，合格的桶装水没必要煮沸饮用。矿泉水因水源取自地壳深处不会受污染，建议直接饮用。

[1]王燕梅,唐震,乔昕,等．江苏省桶装饮用水中铜绿假单胞菌污染情况调查[J].中国卫生检验杂志,2015(12):2019-2020.