□ 李 娟 张诗慧 陈 科 苏嘉妮 广东省食品检验所

检测人员能力验证是实验室微生物检测质量控制的关键环节，其结果直接关系到检验报告的准确性和可靠性。通过能力验证，可以综合判断检测人员的检测水平，进而体现该实验室的检测水平。能力验证作为评价实验室能力的一个重要手段，一直以来受到国内外实验室管理者的广泛重视[1]。它对于实验室而言是重要的外部质量保证手段，能增加客户及相关方对实验室出具可靠数据的信心。

粪链球菌（Streptococcus faecalis），又名粪肠球菌（Enterococcusfaecalis），在水、土壤和人畜的体内及粪便中广泛存在[2]，属于条件致病菌，当机体抵抗力下降或有其他因素影响时，进入人体血液或其他部位，可引起尿路感染、败血症、脑膜炎、化脓性腹部感染、心内膜炎和腹泻发烧等[3]。该菌耐热、耐盐，对不利环境的适应性强、抵抗力强，甚至可以抵抗多种抗生素，因此存活力持久、感染性强[4]，与大肠菌群相比，该菌更适合作为水质粪便污染情况的指标菌，更能客观地反映水质的卫生状况[5]。本文就包装矿泉水中粪链球菌的定量检测对本实验室两名检测人员进行能力验证。

1 材料与方法

1.1 实验菌株

粪链球菌（Streptococcus faecalis）ATCC29212，购自广东省食品微生物安全工程技术研究开发中心，工作菌株为3代，大肠埃希氏菌（Escherichia coli）ATCC25922购自Microbiologics，工作菌株为2代。

1.2 主要试剂与仪器

KF链球菌琼脂培养基（北京陆桥）、脑-心浸萃液态培养基（北京陆桥）、脑-心浸萃琼脂培养基（北京陆桥），抽滤设备（Millipore）、无菌滤膜（Millipore）、恒温培养箱（上海一恒）、旋涡混合器（IKA）。

1.3 检验方法

1.3.1 制备菌悬液

用无菌棉签沾取粪链球菌阳性菌株至3 mL生理盐水管中，测定麦氏浊度，并进行稀释.

1.3.2 阳性污染

各吸取1 mL菌悬液至250 mL矿泉水中，混匀。

1.3.3 过滤

用无菌镊子夹取0.45 µm无菌滤膜至滤床上，固定好无菌滤器，将250 mL污染样品倒入无菌滤器中，启动抽滤装置，完成后将滤膜转移到KF链球菌琼脂培养基上，注意放置时要避免在滤膜和培养基之间夹留有气泡，36 ℃倒置培养48 h。

1.3.4 计数

记录典型菌落数，粪链球菌在KF链球菌琼脂培养基上呈红色或粉红色菌落。

1.3.5 镜检

分别挑取不少于5个典型菌落进行革兰染色，首先挑取菌落涂薄片，用酒精灯灼烧片刻固定，后用结晶紫染色1 min，自来水冲洗，碘液媒染1 min，自来水冲洗，95 %酒精脱色30 s，自来水冲洗，沙黄复染1 min。粪链球菌为革兰氏阳性球菌，常排列成短链状。

1.3.6 确证试验

同时接种到脑-心浸萃琼脂培养基，36 ℃培养48 h，若有菌生长，进行3%过氧化氢酶试验，若无气泡产生，则转接到脑-心浸萃液态培养基及胆汁液态培养基中，分别于45 ℃、36 ℃培养48 h、3 d，观察是否能生长繁殖。粪链球菌为过氧化氢酶阴性，在上述培养基中均能生长。

2 结果

2.1 样品污染

菌悬液麦氏浊度为0.51，稀释6倍，各吸取0.7 mL至250 mL待测矿泉水中。

2.2 计数

检测人员A所做的KF平板上典型菌落数为33个，检测人员B所做的KF平板上典型菌落数为21个。

2.3 镜检

检测人员A挑取的5个典型菌落均为革兰氏阳性球菌，并排列成短链状；检测人员B挑取的5个典型菌落均为革兰氏阳性球菌，并排列成短链状。

2.4 确证试验

检测人员A挑取的5个典型菌落在脑-心浸萃琼脂培养基上有生长，3%过氧化氢酶试验阴性，在脑-心浸萃液态培养基及胆汁液态培养基中均能生长繁殖；检测人员B挑取的5个典型菌落在脑-心浸萃琼脂培养基上有生长，3%过氧化氢酶试验阴性，在脑-心浸萃液态培养基及胆汁液态培养基中均能生长繁殖。

2.5 结果与报告

检测人员A的检测结果为33 CFU/250 mL，检测人员B的检测结果为21 CFU/250 mL。

3 结论

两次独立试验的对数值之差的绝对值为0.20，小于0.45[6-7]，结果为满意，表明A、B检测人员检测矿泉水中粪链球菌的能力符合质量控制要求。

4 讨论

水为生命之源，在人的生命活动中不可或缺。但随着工业化的普及，饮用水的安全问题变得越来越突出，而其中最重要的问题之一便是饮用水的微生物污染，饮用水一旦受到污染，将会引起大规模感染和疾病的爆发[8]。

大肠菌群定植于人及温血动物的肠道中，通过肠道排泄物污染水质，进而传播疾病，但经过氯消毒、污水处理和高浓度盐的环境中，大肠菌群可能多数已失活，所以大肠菌群并不能很好地反映水质的粪便污染情况。而粪链球菌的抵抗力强于大肠菌群，将粪链球菌作为衡量水质卫生质量的指标菌更具有卫生学意义，现行有效的国家标准《饮用天然矿泉水检验方法》（GB8538-2016）将粪链球菌纳入检验指标菌。李飞等研究人员在广东省采集206份水样，开展粪链球菌的污染调查，调查显示有35份水样有粪链球菌污染，污染率为17%[9],因此饮用水中卫生指标菌粪链球菌（Streptococcus faecalis）、铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginosa）等的监测至关重要。

开展此次能力验证，旨在考核本实验室试验人员的检测能力，找出检测过程的薄弱之处，发现问题，解决问题，提高实验室检测人员对食品微生物检验和细菌性疾病诊断的应急能力，促进实验室检验水平的不断提高[10]。本实验室还将有序地进行其他食品微生物检验的能力验证，以保证本实验室检测人员稳定的检测水平。

[1]江志杰,高春.化妆品中金黄色葡萄球菌和铜绿假单胞菌检出能力验证结果与分析[J].香料香精化妆品,2015(6):29-32,36.

[2]周玲,李秀贵,王子桂.一起食用甜白酒所致粪链球菌食物中毒[J].中国卫生检验杂志,1991(3):180-181.

[3]成晓维,唐食明,游淑珠.水中粪链球菌的检测研究[J].科技资讯,2010(15):223-225.

[4]于泓洋,刘燕霏,杨建德.粪链球菌的分离与鉴定[J].黑龙江畜牧兽医,2012(17):97-98.

[5]张淑红,吴清平,张菊梅,等.水中粪链球菌显色培养基-滤膜法快速检测初步研究[J].中国卫生检验杂志,2008(9):1718-1720,1731.

[6]中华人民共和国,国家质量监督检验检疫总局,中国国家标准化管理委员会.食品和动物饲料微生物学30℃菌落计数方法:SN/T1800-2006[S].北京:中国标准出版社,2006.

[7]B Standards.Microbiology of food and animal feeding stuffs-Horizontal method for the enumeration of microorganismsColony-count technique[S].Iso international Standard,2006.

[8]李飞.包装饮用泉水食源性致病菌分布规律和遗传多样性研究[D].广州:华南理工大学,2013.

[9]李飞,吴清平,张菊梅,等.矿泉水和山泉水中粪链球菌污染调查及主要污染菌株的ERIC-PCR分型研究[J].微生物学通报,2013(5):881-890.

[10]肖波,周阳,孙松松.食品中副溶血性弧菌检测能力验证分析[J].预防医学情报杂志,2017(5):447-449.