张传燕

（宜宾市第三人民医院药剂科 四川 宜宾 644000）

高效液相色谱法，简称HPLC，是现今各国药典收录过程中最常用的分析方法，因为其高效、灵敏、选择性好等诸多优点被广泛应用于药物和制剂的含量测定以及杂质的分析过程中。就目前的实际情况而言，在市场中，色谱柱是多种多样的，不仅品牌繁多，而且种类繁多，而在色谱柱的选择过程中对某种具体样品进行具体分析时，也往往因为色谱柱在选择性上存在差异，最终导致在溶质的保留值、色谱峰之间的分离度以及在色谱峰的出峰顺序都存在较大的差异。由此可见，在高效液相色谱法中，对色谱柱进行选择是尤为重要的，直接关系到中药成分分析的好坏以及成败。

1.资料和方法

1.1 一般资料

仪器：Agilent1260高效液相色谱仪、Waterse2695高效液相色谱仪、Agilent6320Ion Trap型质谱仪。

对照品：芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚、补骨脂素、异补骨脂素、大黄对照药材、补骨脂对照药材等[1]。

1.2 方法

1.2.1 色谱条件 大黄：将乙腈作为流动相A，将0.1%磷酸水溶液作为B，梯度洗脱为：0～50分钟，95%A→64%A；50～73分钟，64%A→15%A；73～74分钟，15%A→95%A；74～80分钟，95%A，其流速为1.0毫升/每分钟，检测波长为254、431nm，柱温为40摄氏度，进样量在10μL。

补骨脂：将甲醇作为流动相A，将水作为B，梯度洗脱为：0～20分钟，50%A→70%A；20～45分钟，70%A→85%A；45～50分钟，85%A→90%A；50～60分钟，90%A，其流速为1.0毫升/每分钟，检测波长为308nm，柱温为30摄氏度，进样量在10μL[2]。

1.2.2 制备对照品溶液 首先，取适量的对照品，其次，在其中加入甲醇，使其变成1毫升且含有芦荟大黄素、大黄素、大黄酸、大黄酚各16μL，另外，番泻苷A、HBGG等各8μL。最后，在对照品溶液中加入乙醇，制成每1毫升对照品中就含有10μL补骨脂素、异补骨脂素的溶液。

1.2.3 植被供试品溶液 大黄：取0.5克的大黄对照药材，将其放入锥形瓶中，在其中加入50毫升有70%乙醇，再采用超声对其进行30分钟的处理（300w，45kHz），最后，采用0.45μL的滤膜进行过滤，取续滤液即可得到[3]。

补骨脂：取0.5克的大黄对照药材，将其放入锥形瓶中，在其中加入25毫升70%乙醇，再采用超声对其进行30分钟的处理（300w，45kHz），最后，采用0.45μL的滤膜进行过滤，取续滤液即可得到[4]。

2.结果

色谱柱的相似度越高，对大黄的分离效果也就越弱，对补骨脂的分离规律也就越不明显。

3.讨论

在USP法中，高效液相色谱在进行性能评价时，一般采用NIST标准参照物来评价色谱柱，具体而言，参照物可包括尿嘧啶、甲苯、乙苯、阿米替林等。而通过一系列的测试，最终得出了色谱柱的四个参数，即：疏水性、螯合性、硅醇基活性、空间选择性。而在对这四个参数进行比较时，一般采用5个值来进行表示，即：Hy、CTF、CFA、TFA、BD，分别表示为乙苯的容量因子、醌茜的拖尾因子、阿米替林的容量因子、阿米替林的拖尾因子、结合密度。

通过上文的应用试验证明，色谱柱的相似度越高，对大黄的分离效果也就越弱，对补骨脂的分离规律也就越不明显。而通过对大黄、补骨脂的分析，可以对以下三点进行明确，即：

（1）现今所存在的色谱柱选择方法可以应用在中药分析中，不仅可以提升分析方法的重现性，而且可以实现实验室数据的传递。

（2）色谱柱的评价较为复杂，且分离效能不仅与色谱柱本身存在联系，而且和药材的性质存在一定的联系。

（3）色谱柱选择方法不够完整，有待改善，一种色谱柱选择方法也难以适应多种中药材的分析。

[1]童杰文，张盛，李娟，李佳银，蔡燕南，李银花.高效液相色谱法测定补骨脂中补骨脂素和异补骨脂素的分析[J].农产品加工，2015，(02):44-46.

[2]叶六平，孙磊，王明娟，金红宇，汪暐东，马双成.等效色谱柱选择在大黄和补骨脂多成分高效液相色谱分析中的应用[J].药物分析杂志，2015，35(06):945-953.[2017-08-04].DOI：

[3]陈永刚，张培影，马传学，吴世强，刘大跃.五参二连颗粒高效液相色谱指纹图谱研究及多成分定量分析[J].中国医药工业杂志，2013，44(06):604-608.[2017-08-04].

[4]赖正权，易宇阳，廖慧君，苏冀彦，廖祝元，林吉，苏子仁.苦木注射液高效液相色谱指纹图谱研究及多成分定量分析[J].中国中药志，2011，36(13):1739-1743.[2017-08-04].