钟淑梅，郭晓亮，郭杰，游景茂

(1.湖北省农业科学院中药材研究所/湖北省农业科技创新中心，湖北 恩施 445000；2.九州天润(武汉)中药研究院有限公司，湖北 武汉 430000)

·中药农业·

独活种子生活力测定的四唑染色法及其与发芽率的相关性研究△

钟淑梅1，2，郭晓亮1*，郭杰1，游景茂1

(1.湖北省农业科学院中药材研究所/湖北省农业科技创新中心，湖北 恩施 445000；2.九州天润(武汉)中药研究院有限公司，湖北 武汉 430000)

目的筛选TTC法测定独活种子生活力的最佳条件，并明确生活力与发芽率的相关性。方法比较不同浓度、温度、时间条件下染色的效果；以15份不同来源独活种子为材料，进行生活力测定和发芽率检测。结果TTC法测定独活种子生活力的最适条件是45 ℃恒温条件下在1%的TTC溶液中染色50 min；独活种子生活力(X)与发芽率(Y)回归方程为Y=0.7326X-0.09%。结论45 ℃恒温条件下在1%的TTC溶液中染色50 min，是测定独活种子生活力的适宜条件，其测得的生活力与发芽率呈显著的正相关。

独活种子；生活力；发芽率；相关性

独活Angelicae pubescentis radix为伞形科植物重齿毛当归的干燥根，是我国常用中药材[1]。湖北省独活人工种植已有300多年的历史[2]，现有种植面积3333余公顷，已成为山区农户脱贫致富的支柱产业。

近年来，随着人工种植面积的不断扩大，独活种子繁殖效率成为产业发展的限制性因素。独活种子多来源于农户自留，同时因种子比较细小，其质量易受贮藏环境影响而发生变化，导致市场上独活种子质量层次不齐。林先明等虽然对不同来源的独活种子就净度、千粒重、含水量和发芽率四个指标进行了聚类分析，制定了独活种子质量的分级标准[2]，但所用独活种子发芽率检测周期太长，需20天以上才能有结果。在种子贸易中，常常因为时间紧迫，不可能采用常规的发芽试验来测定发芽率。采用测定种子生活力的方法，可以快速确定种子的发芽潜力，保证贸易正常进行。在生产中，同样也需要快速准确测定种子的发芽潜力来确定用种量[3]。基于此现状，本文开展了四唑染色法测定独活种子生活力适宜条件的研究，并研究生活力与发芽率的相关性关系，为独活种子质量快速检测提供技术支持，指导独活生产。

1 材料与方法

1.1 试验材料

以湖北、四川、甘肃、陕西、宁夏等不同独活产地征集的15份独活种子为研究材料，种子收集地区情况见表1。

表1 独活种子来源情况表

1.2 试验方法

1.2.1 四唑染色法测定种子生活力的条件优化 采用3因素3水平正交试验设计(表2)。先将独活种子放入清水中浸泡8小时后，使种子充分吸胀。每份30粒，沿种胚中央准确切开，取每粒种子的一半备用。把切好的种子分别放在培养皿内，加不同浓度的TTC溶液，以浸没种子为度。将培养皿放入不同温度的恒温培养箱内放置染色。染色结束后倒出药液，用自来水冲洗种子2或3次，立即观察种胚着色情况，判断种子有无生活力。

判断标准：胚发育良好、完整、整个胚染成鲜红色或红色，子叶有小部分坏死，其部位不是胚中轴和子叶连接处，胚虽有小部分坏死，但其他部位完好的，为有生活力种子；其他均为无活力或死种子。

表2 四唑染色法测定独活种子生活力试验因素水平表

1.2.2不同来源独活种子生活力与发芽率测定 独活种子生活力测定方法采用优化后的四唑染色法进行。

独活种子发芽率测定方法：采用放有3层湿润滤纸的培养皿进行发芽培养。每个培养皿中均匀放入50粒巴东独活种子，3次重复，放入培养箱(每日光照期12小时、温度为25 ℃，黑暗期12小时、温度为20 ℃)中进行培养，保持湿润，每日检查培养皿中水分情况，统计发芽数，并用蒸馏水清洗发霉种子，若种子已经霉烂坏死，则及时清除。独活种子一般在6至9天开始发芽，以胚根顶破种皮2 mm以上为发芽的标准，以连续5天没有新发芽种子视为发芽结束。

2 结果与分析

2.1 不同染色处理对独活种子生活力测定的影响

不同染色处理下，均能检测出独活种子的生活力(表3)。

表3 不同染色处理测定独活种子生活力

表3结果表明，根据R值的大小，各因素对独活种子染色结果影响的程度从高到低依次为染色温度>染色时间> TTC浓度，即染色温度为最主要因素，染色时间为主要因素，TTC浓度为次要因素。根据各试验中级差分析的独活种子染色结果，确定较优组合为：用1%浓度的TTC，在45 ℃恒温条件下，染色50分钟。

2.2 独活种子生活力与发芽率之间的关系

采用1%浓度的TTC，在45 ℃恒温条件下，染色50分钟的条件检测独活种子生活力，同时测定独活种子发芽率。比较发现独活种子生活力高于发芽率(表4)，且两者存在极显著的相关性(表5)。设四唑法测得生活力为X，发芽率为Y，求得回归方程Y=0.732 6X-0.09%，R2=0.885 8。

表4 不同来源独活种子的生活力和发芽率

表5 独活种子生活力与发芽率之间的相关性

**.在P0.01水平(双侧)上显著相关。

3 讨论

种子生活力反映了种子发芽的潜在能力或种胚具有的生命力，是判断种子质量的重要指标[4]。同一种子样品中，真实的生活力应该大于或等于发芽率[3]。四唑染色法，是《国际种子检验规程》中用于测定种子的生活力的一种有效方法[5-7]。本研究中采用四唑染色法测得独活种子生活力均大于独活种子发芽率，可见用四唑染色法测定独活种子生活力是可行的方法。

本研究发现，1%浓度TTC对独活种子染色结果优于1.5%浓度TTC，出现了低浓度TTC比高浓度TTC染色效果好的结果，这与严虎等在嵩草种子研究中的结果比较一致[8]。

本研究发现在不同染色温度下测定种子生活力，各温度间有极显著性差异，随着温度的提高，测定的生活力也在提高，以45 ℃测定效果最好。本研究中45 ℃测定独活种子生活力的结果比独活种子发芽率明显偏高，这与喻虹在马尾松种子研究中发现40 ℃染色结果明显偏高比较一致[9]。

通过以上试验发现，独活种子生活力的TTC法最适条件为：用1%浓度的TTC，在45 ℃恒温条件下，染色50分钟。

[1] 国家药典委员会.中华人民共和国药典：一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：263.

[2] 林先明，郭晓亮，郭杰等.独活种子质量标准研究[J].安徽农业科学，2015，43(33)：184-185，271.

[3] 沈宇峰，王志安，俞旭平等.白术种子生活力测定方法及其与发芽率的相关性研究[J].中国中药杂志，2008，33(3)：248-250.

[4] 石磊，徐广灿，杨红兵.四唑染色法测定厚朴种子生活力的条件研究[J].安徽农业科学，2013，41(13)：5706，5730.

[5] 国际种子检验协会.农业部全国农作物种子质量监督检测中心，浙江大学种子科学中心译，1996国际种子检验规程[M].北京：中国农业出版社出版，1999：4.

[6] GB/T 3543.1-1995 农作物种子检验规程[S]，85.

[7] 陶嘉龄，郑光华.种子活力[M].北京：科学出版社，19.

[8] 严虎，苟桂香，王得贤等.TTC浓度对嵩草种子染色的影响[J].青海草业，1999(3)：48.

[9] 喻虹.缩短马尾松种子四唑法生活力测定时间的研究[J].种子，1996(6)：41-43.

StudyonViabilityDeterminationusingTTCandtheCorrelationbetweenViabilityandGerminationRateofAngelicapubescensSeed

ZHONGShumei1，2，GUOXiaoliang1*，GUOJie1，YOUJingmao1

(1.InstituteofChineseHerbalMedicines，HubeiAcademyofAgriculturalSciences/Sub-centerofChineseHerbalMedicines，HubeiAgriculturalScienceandTechnologyInnovationCenter，Enshi445000，China；2.ResearchInstituteofJoinativeChineseTraditionalMedicineCo.，Ltd.，Wuhan430000，China)

Objective：To screen the optimized methods for detection seed viability ofAngelicapubescensseed，and determine the relationship between seed viability and germination rate.Method：The effect of dyeing in different concentrations，temperature and time conditions was compared.Use 15 seeds from different sources as a material，the determination of viability and germination rate were tested.ResultsThe optimum condition of determination seed viability using TTC is soaking seeds in the 1% TTC solution for 50 minutes under the condition of 45 ℃.The regression equation was found out between seed viability(X)and germination rate(Y)，which was Y=0.7326X-0.09%。ConclusionThe optimum condition of determination seed viability using TTC is soaking seeds in the 1% TTC solution for 50 minutes under the condition of 45 ℃.Furthermore，seed viability was significant related with germination rate of RadixAngelicapubescensseed.

Angelicapubescensseed；viability；germination rate；correlation

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.12.015

工业和信息化部2014年中药材生产基地建设扶持项目：道地药材巴东独活规范化生产基地建设

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郭晓亮，助理研究员；研究方向：药用植物栽培与育种研究；Tel：(0718)8417890，E-mail：119626192@qq.com。

2017-06-27)