王鹏思，王玉洁，薛健*，李嘉欣，金红宇，马双成

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.中国食品药品检定研究院，北京 100050)

·中药农业·

溴氰菊酯和氟啶虫胺腈两种农药分别对金银花品质的影响△

王鹏思1，王玉洁1，薛健1*，李嘉欣1，金红宇2，马双成2

(1.中国医学科学院 北京协和医学院 药用植物研究所，北京 100193；2.中国食品药品检定研究院，北京 100050)

目的研究农药溴氰菊酯、氟啶虫胺腈分别对金银花中绿原酸和木犀草苷含量的影响，为两种农药的合理使用提供参考。方法采用田间试验的方法采集金银花样品，样品经70%乙醇超声提取后，采用高效液相色谱-紫外检测器法(HPLC-UV法)测定样品中绿原酸、木犀草苷的含量，对含量结果进行统计学分析。结果两年两地的试验结果显示溴氰菊酯、氟啶虫胺腈对金银花中绿原酸和木犀草苷的平均含量与空白组相比均无显著性影响(P>0.05)。结论溴氰菊酯、氟啶虫胺腈对金银花品质无不良影响，可用于金银花蚜虫的防治。

溴氰菊酯；氟啶虫胺腈；农药；金银花；品质

长期以来，由于人们对中药资源不合理地开发利用及生态环境的改变、破坏，目前依赖自然生态提供的野生药用生物资源种类和数量已不能满足社会需求。百余种常用药材生产现状分析表明，大约70%的药材商品是通过人工生产进行替代和补偿以保障供给[1]。而在人工生产过程中，药用植物和其他农作物一样会受到各种病虫害的侵袭，为了降低损失、增产增收，便不可避免地要使用各种农药。目前，对中药材生产过程中农药使用的相关研究主要集中在农药药效的优选、残留检测、风险评估等问题上，忽视了农药的使用对药用植物成分的影响。薛健[2]认为在中药材种植过程中农药作为一种重要的农艺措施虽不得不用，但是必须要考虑农药的使用对中药材有效成分的影响，农药的使用若影响到药材的成分含量和组成，这种农药就要慎重使用，趋利除弊。

本研究采用田间试验的方法，选择金银花生产中对蚜虫防治效果良好的溴氰菊酯、氟啶虫胺腈两种农药，考察了三倍推荐剂量(高剂量)下两种农药对2015版《中华人民共和国药典》规定的金银花指标成分(绿原酸和木犀草苷)含量的影响，旨在较全面地评价两种农药对金银花品质的影响，从而为两种农药在金银花上的科学合理应用提供理论依据。

1 仪器与材料

1.1 主要仪器

Waters 2695高效液相色谱仪，配紫外检测器；Reprosil-Pur 120 C18-AQ色谱柱(5μm，250mm×4.6mm，德国Dr.Maisch GmbH)；电子分析天平(瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司)；SB-5200DT 超声波清洗机(宁波新芝生物科技股份有限公司)。

1.2 主要材料

乙醇、冰醋酸(分析纯，北京化工厂)；乙腈(色谱纯，美国Fisher公司)；乙醇(色谱纯，天津光复科技发展有限公司)；Milli-Q超纯水；绿原酸20 mg、木犀草苷25 mg(上海阿拉丁生化科技股份有限公司)；25 g·L-1溴氰菊酯乳油(拜耳作物科学有限公司)；50%氟啶虫胺腈水分散颗粒(美国陶氏益农公司)；金银花样品[由田间试验获得，经中国医学科学院药用植物研究所张本刚研究员鉴定为忍冬科植物忍冬LonicerajaponicaThunb.的干燥花蕾。

2 实验方法

2.1 田间试验及样品采集

参照中华人民共和国农业部所颁行业标准《农药残留试验准则》(NY/T788-2004)[3]进行田间试验设计。试验地2015年设在河南省封丘县黄德镇西于村金银花(品种为大毛花)种植基地，2016年设在河南省封丘县陈固镇东仲宫村金银花(品种为大毛花)种植基地，分别设置空白对照组、推荐剂量组(溴氰菊酯7.5 g·hm-2、氟啶虫胺腈22.5 g·hm-2)、三倍推荐剂量组(溴氰菊酯22.5 g·hm-2、氟啶虫胺腈67.5 g·hm-2)三个处理(高剂量农药处理对金银花成分的影响往往更加明显，因此仅测定空白对照处理组和三倍推荐剂量组样品中绿原酸和木犀草苷的含量)，每个处理3 个重复小区，小区面积约为15 m2，小区间设隔离行约3 m。

在金银花花蕾初期蚜虫发生时，均匀喷施农药于各小区内的每一植株上，分别于施药后不同时期(2015年采样时间为施药后2 h(0 d)、1、2、3、4、5、7、9、11、13、15 d；2016年采样时间为施药后2 h(0 d)、1、2、3、4、6、8、10、12、15 d。在各小区内每一植株上采用五点法采集金银花样品共约100 g，送至烘房烘干(40 ℃ 升温至60 ℃)处理20 h，干燥样品放至室温后储存于-20 ℃冰箱待测。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取绿原酸对照品适量于10 mL容量瓶，加70%乙醇(本文提到的70%乙醇均指70%乙醇水溶液)定容至刻度，配制成1.25 mg·mL-1的绿原酸对照品母液。精密称取木犀草苷对照品适量于10 mL容量瓶，加70%乙醇定容至刻度，配制成1.05 mg·mL-1木犀草苷对照品母液。取上述木犀草苷和绿原酸对照品母液各1 mL于25 mL容量瓶，加70%乙醇定容至刻度，得到每毫升含50 μg绿原酸和42 μg木犀草苷的混合对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

[4-6]，确定供试品溶液的制备方法为：取金银花粉末(过2号筛)约1 g，精密称定，置100 mL具塞锥形瓶中。精密加入70%乙醇20 mL，称定重量。超声处理1 h，放冷，再称定重量，用70%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过。取续滤液过0.45 μm微孔滤膜，即得。

2.4 色谱分析条件

色谱柱：Reprosil-Pur 120 C18-AQ色谱柱(5μm，250mm×4.6mm，德国Dr.Maisch GmbH)；柱温：30 ℃；流动相：0.5%冰醋酸水溶液(A)-乙腈(B)，梯度洗脱程序见表1；流速1mL·min-1；检测波长：350 nm；进样量：10 μL；外标法定量。

表1 流动相梯度洗脱程序

2.5 数据分析方法

按照2.3、2.4所述方法对获得的168份金银花样品进行测定，采用SPSS 19.0软件对空白对照组(不施药)和实验组(施用3倍推荐剂量农药)金银花样品中绿原酸和木犀草苷的平均含量进行平均数差异检验。

3 结果与分析

对2015年和2016年对照组和施药组样品进行测定，得到金银花中绿原酸和木犀草含量如表2、表3所示，由表2、表3知对照组和施药组样品中绿原酸和木犀草苷含量均不低于2015版《中华人民共和国药典》的规定值(金银花按干燥品计算，含绿原酸不得少于1.5%；含木犀草苷不得少于0.050%)。且经SPSS 19.0软件分析得：两年两地实验组金银花中绿原酸和木犀草苷的平均含量与对照组金银花中绿原酸和木犀草苷的平均含量之间无显著性差异(P>0.05)。

表2 对照组与实验组(溴氰菊酯)金银花中绿原酸和木犀草苷含量(n=3)

注：CK为空白对照处理(对照组)；3TJ为3倍推荐剂量施药处理(实验组)；a：P>0.05。

表3 对照组与实验组(氟啶虫胺腈)金银花中绿原酸和木犀草苷含量(n=3)

注：CK为空白对照处理(对照组)；3TJ为3倍推荐剂量施药处理(实验组)；a：P>0.05。

将两年两地对照组和实验组金银花中绿原酸含量-施药后天数、木犀草苷含量-施药后天数绘制折线图分别见图1、图2、图3、图4。

图1 对照组和实验组(溴氰菊酯)金银花样品中绿原酸含量-施药后天数折线图

图2 对照组和实验组(溴氰菊酯)金银花样品中木犀草苷含量-施药后天数折线图

图3 对照组和实验组(氟啶虫胺腈)金银花样品中绿原酸含量-施药后天数折线图

图4 对照组和实验组(氟啶虫胺腈)金银花样品中木犀草苷含量-施药后天数折线图

由图1、图2、图3、图4知两年两地的实验组金银花中绿原酸、木犀草苷的含量与对照组金银花中绿原酸、木犀草苷的含量变化趋势基本一致。

4 讨论

4.1 不同农药对金银花中绿原酸和木犀草苷含量的影响

本研究表明溴氰菊酯、氟啶虫胺腈两种农药对金银花中绿原酸和木犀草苷的含量均无显著性影响。而李嘉欣等[7]研究发现高剂量吡虫啉、啶虫脒、三唑酮的使用对金银花中绿原酸含量的影响分别为：显著提高、显著提高、显著降低；低剂量吡虫啉、啶虫脒、三唑酮的使用对金银花中绿原酸含量的影响分别为：显著提高、无显著性差异、显著降低。刘璐[8]研究发现高剂量烯啶虫胺的使用可显著促进金银花中绿原酸的积累而显著抑制木犀草苷的积累。刘亚南等[9]研究发现高、低剂量噻虫嗪的使用对金银花中绿原酸和木犀草苷的含量均无显著性影响。陈美艳等[10-11]研究发现高、低剂量吡虫啉的使用对金银花中木犀草苷的含量均无显著性影响而对绿原酸的含量具有一定促进作用(高剂量促进作用显著；低剂量促进作用不显著)。可见，农药的用量、种类等对同一药材的相同成分会产生不同影响。

4.2 药用植物上农药的合理使用

药用植物不同于粮食、蔬菜、水果等作物，作为中药(包括中药材、中药饮片、中成药)的主要来源，其首要价值在于预防、治疗疾病及其良好的养生保健作用。因此，药用植物上使用农药时，既要保证农药残留的安全性，也应重视农药的使用对药用植物有效成分含量的影响。本研究表明溴氰菊酯和氟啶虫胺腈对金银花中绿原酸和木犀草苷的含量无显著性影响，且课题组已经建立两种农药的安全使用规范[12-13]，经实地调研和田间药效试验表明两种农药均可有效防治金银花蚜虫虫害且对金银花外观性状无不良影响，因此溴氰菊酯和氟啶虫胺腈可以在金银花产区进行推广使用。不过，由于中药往往是依靠其复杂的有效成分群发挥作用，建议可以借助中药指纹图谱等技术更加深入全面地研究农药对中药有效成分群的影响。此外，若农药对药用植物有效成分的含量有影响，那么其影响机理也需进一步深入的研究。

参考文献

[1] 段金廒，张伯礼，宿树兰，等.基于循环经济理论的中药资源循环利用策略与模式探讨[J].中草药，2015，46(12)：1715-1722.

[2] 薛健.中药农药残留、重金属问题研究.//第十届全国中药和天然药物学术研讨会论文集[C].2009：509-513.

[3] 中华人民共和国农业部.NY/T788-2004《农药残留试验准则》[S].北京：中国农业出版社，2004.

[4] 张芳，孙希芳，张永清，等.金银花药材的HPLC指纹图谱及绿原酸、木犀草苷含量的同时测定[J].四川农业大学学报，2014，32(2)：154-159.

[5] 马双成，刘燕，毕培曦，等.金银花药材中抗呼吸道病毒感染的黄酮类成分的定量研究[J].药物分析杂志，2006，26(4)：426-430.

[6] 国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[S].北京：中国医药科技出版社，2015：221.

[7] 李嘉欣，薛 健，金红宇，等.金银花常用农药对其绿原酸含量影响的初步研究[J].中医药学报，2017，45(2)：54-57.

[8] 刘璐.金银花中两种除虫菊酯类农药的残留动态研究[D].北京协和医学院，2015.

[9] 刘亚南，李 勇，董 杰，等.噻虫嗪对金银花药材指标成分含量影响的初步研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2015，17(11)：2328-2334.

[10] 陈美艳，陈 君，李昆同，等.吡虫啉对金银花绿原酸含量影响的初步研究[J].世界科学技术-中医药现代化，2006，8(6)：54-57.

[11] 陈美艳，于 晶，陈 君，等.吡虫啉对金银花中木犀草苷量的影响[J].中草药，2008，39(3)：441-443.

[12] 王玉洁，薛 健，顾炎，等.溴氰菊酯残留测定方法及其在金银花中残留动态研究[J].中国中药杂志，2016，41(8)：1435-1438.

[13] 王玉洁，薛 健，顾炎，等.金银花中氟啶虫胺腈残留测定方法及消解动态研究[J].中药材，2016，39(11)：2443-2446.

EffectsofDeltamethrinandSulfoxafloronQualityofHoneysuckle

WANGPengsi1，WANGYujie1，XUEJian1*，LIJiaxin1，JINHongyu2，MAShuangcheng2

(1.InstituteofMedicinalPlantDevelopment，ChineseAcademyofMedicalScience&PekingUnionMedicalCollege，Beijing100193，China；2.NationalInstitutesforFoodandDrugControl，Beijing100050，China)

Objective：To research the effects of deltamethrin and sulfoxaflor on the content of chlorogenic acid and galuteolin in honeysuckle and provide reference for the rational use of the two pesticides.MethodsField experiments were conducted and the collected honeysuckle samples were extracted with 70% ethanol under ultrasound assistance，detected by HPLC with ultraviolet detector and determined by external standard method.ResultsThe results showed that there was no significant effect(P>0.05)on the average content of chlorogenic acid and galuteolin between the experimental group and the blank control group.ConclusionDeltamethrin and sulfoxaflor had no adverse effects on the quality of honeysuckle and could be used for the prevention and control of aphids during the cultivation ofLonicerajaponica.

Honeysuckle；pesticides；deltamethrin；sulfoxaflor；chlorogenic acid；galuteolin；quality

10.13313/j.issn.1673-4890.2017.12.014

国家重大新药创制专项(2014ZX09304307-002)

*

薛健，研究员，研究方向：中药有效成分分析、质量控制及中药有害污染物研究；Tel：(010)57833097，E-mail：xuejian200@sina.com

2017-08-22)