何金芬

摘 要：本文主要对种子检验技术的应用实践进行分析。具体是对RFLP技术、RAPD技术以及免疫3种检验技术的优劣势进行分析的基础上，通过查阅相关资料对其在各类农作物中的应用原理与应用效果进行归纳。希望各种检验技术在农作物种子检测中的应用，在提高其纯度方面发挥一定的辅助作用。

关键词：檢验技术；RFLP技术；RAPD技术；免疫技术；应用实践

中图分类号：S-1 文献标识码：A DOI：10.11974/nyyjs.20171232006

种子为农业生产的基础，种子质量与农民收入以及种子经销商效益之间存在密切的关联性。在种子市场国际化局势中，农业生产应用的种子质量应该得到切实的保障，随着科学技术的发展与先进，多样化技术在种子质量检测中获得较大的应用空间，尤其是分子标记技术的应用为品种检定供应了新颖手段，就此本文展开相关论述。

1 RFLP技术在种子纯度检测中的应用

RFLP（限制性内切酶片段长度多态性）为在DNA水平上首次应用在种子纯度与品种鉴定领域的技术，因为该技术在应用之时投入时间、精力、资金量大，程序繁杂等缘故，所以其通常不被应用在种子质量检测工作中，但是借用某品种特殊RFLP标记可以精确性的标记该品种，并且维护其多形态稳定性方面体现出一定的优越性，重复性优良、精准性高，体现出共显特征。现阶段，RFLP技术在云南玉溪市玉米、小麦、蚕豆、水稻、甘蔗等农作品质检测上具有一定的应用频率。

Smith应用38个探针精确的辨识了78个玉米杂交种，同时发现RFLP同工酶与蛋白质电泳现象无法辨识玉米杂交种这一问题。Vacine等人应用RFLP技术辨识了54种意大利寻常小麦品种。RFLP技术在种子品质检测中的应用流程可以做出如下概述：提取DNA是首要步骤，继而应用限制性内切酶酶切DNA，并应用凝胶电泳分解DNA片段，将DNA片段转移至滤膜上；应用放射性标记的探针杂交呈现特定的DNA片段（Southern杂交）与对结果进行分析。

2 RAPD技术在种子检测中的应用

RAPD（随机扩增的多态性DNA）技术劣势体现在稳定性与重复性差方面上，所以其不是种子检测首选技术，但是若某一作物没有任何分子生物学研究基础的情景下，对其进行指纹图谱建设与遗传多样性解析工作，体现出快捷性与简洁性特征，不会产生放射性污染，投入资金低廉、分辩率较高、灵活性强，RAPD技术在农作物、蔬菜作物与果树方面已经有所应用。

Hu对Brassica属作物进行鉴定过程中，发现4个引物可以辨识14个硬花球花椰菜与12个花椰菜。Sticher应用RAPD技术证明9个RAPD多态性片断可精确的辨识27个大麦品系[1]。赵久然、李启云分别应用RAPD分子标记技术建设了玉米自交系与其双亲的DNA指纹图谱，其在玉米自交系与杂交种真实性与纯度鉴定领域中拥有较高的应用频率。朱青竹等人应用16个引物对来自中国、美国、法国与澳大利亚等不同国家的棉花品种（系）进行RAPD分析，发现了5个多态性优良的引物。

为了达到弥补RAPD重复性差的缺陷，通常在对种子检测过程中创设重复实验。作为DNA多态性标记位点的条带应带有可重复性特征，重复性优良是其最重要的取舍凭据，而条带的强弱不应该作为取舍的凭据。参照Thormann对十字花科植物解析结果，发现RAPD产物强弱和该产物在基因组中的拷贝数之间不存在直接的关联性，但是和引物、模板的同源性程度相关联。

3 免疫技术在种子纯度检测中的应用

免疫技术在种子纯度检测上的典型应用为大麦。Deichl等人应用定量免疫电泳技术鉴定了酿造大麦的多样化品种；Burbidge等人从禾谷类贮藏蛋白单克隆抗体内提取出抗体21/23，把食用大麦Cape与酿造大麦Clipper精确的区分开，与此同时建设了斑点酶联免疫法[2]。Brinke等人应用玉米自交系的特点醇溶蛋白制得的单克隆抗体和7个自交系进行酶联免疫测检测，发现其间存在显著的交叉反应。

在免疫技术在种传病毒检测领域中获得广泛应用的情况下，抗原检测技术被研制与应用。沈建国等人应用抗原获得与一步RT-PCR 相结合的方法，同时借助完善相关条件的方法，确定一步IC-RT-PCR 的反应流程，并且对该方法特异性与现实检测效果进行辩证。并对菜豆荚斑驳病毒免疫捕获一步RT-PCR 检验。

4 结束语

在知识经济一体化时代中，国内种子检验技术获得优质的发展空间，种子检测研讨工作日渐深入化，但是与他类学科相比较，种子检测发展成熟度依然缺乏。所以在日后的研究与实践工作中，应该积极的将高端技术与传统技术整合在一起，构建一套行之有效的技术体系，从根本上处理与农作物检测相关的现实问题，为农业最大效益的取得提供基础条件。

参考文献

[1]时伟芳，谢宗铭，杨丽明，王建华，孙群.基于近红外光谱技术的春小麦单粒种子活力鉴定[J].麦类作物学报，2016（2）：200-205.

[2]刘小慧，邹满钰，印丽萍，郭水良.检疫性杂草假高粱与近缘植物种子的波谱鉴别方法[J].浙江大学学报（农业与生命科学版），2015（4）：421-427.