李安毅 杨洋 刘莹 郭晓汐 郝倩 徐天瑞 安输

（昆明理工大学生命科学与技术学院 云南省高校靶点药物筛选与利用重点实验室，昆明 650500）

A-Raf-S214C突变体的构建、表达及其对MAPK信号通路的影响

李安毅 杨洋 刘莹 郭晓汐 郝倩 徐天瑞 安输

（昆明理工大学生命科学与技术学院 云南省高校靶点药物筛选与利用重点实验室，昆明 650500）

为了观察A-Raf的突变体A-Raf-S214C对MAPK（mitogen-activated protein kinase，丝裂原活化蛋白激酶）信号通路的影响，并探讨其诱发肺癌和朗格汉斯增生症的可能分子机制。通过定点突变构建pcDNA5-FRT-TO-A-Raf-S214C突变质粒，并利用该质粒构建稳定表达A-Raf-S214C突变体的HEK293细胞系，之后通过检测下游ERK磷酸化程度，确定该突变体对MAPK信号通路的影响。结果显示，通过实验成功构建了稳定表达A-Raf-S214C突变体的细胞系，在不同浓度的多西环素诱导下，其表达量有所不同。与野生型相比，A-Raf-S214C突变体可明显增强MAPK信号通路中下游信号分子ERK的磷酸化。结果表明A-Raf-S214C突变体是A-Raf激酶的激活突变体，可以导致MAPK信号通路下游信号分子ERK磷酸化明显增强。

A-Raf激酶；MAPK信号通路；信号传导

Raf激 酶（Rapidly accelerated fibrosarcoma） 是逆转录病毒致癌基因v-Raf的同源蛋白，它调控细胞的生长、分化、转化和凋亡等诸多生命过程，Raf-MEK-ERK通路是细胞信号传导的一条主干通路，这条通路的调控失常是细胞癌变的主要原因之一［1-2］。

Raf激酶家族有3个成员A-Raf、B-Raf和C-Raf（Raf-1），它们均可被上游信号分子Ras激酶激活（Ras突变和异常活化与20%的人类癌症相关［3］），从细胞质转位到细胞膜，并通过磷酸化靶蛋白MEK来进一步激活ERK。但3个成员生物学功能却各有所不同［4-5］。……