郭婉姝 史宝和 王楠 陈晓虹

补体C3d-p28对阿尔茨海默病DNA疫苗的免疫增强作用

郭婉姝 史宝和 王楠 陈晓虹

目的探讨补体C3d-p28作为分子佐剂，在阿尔茨海默病DNA疫苗基因免疫中的作用。方法在第1、8、22、43、64、85、106、127天，将重组质粒p(Aβ3-10)10、p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3和pcDNA3.1(+)肌肉注射于APP/PS1双转基因鼠后腿股四头肌内。疫苗接种前、自第2次注射开始每次接种后7天取鼠眶静脉血共8次，以ELISA法检测抗Aβ抗体的滴度和分型；第8次(最后1次)眶静脉取血后进行6 d的Morris水迷宫实验，通过定位航行和空间探索实验评估小鼠空间学习记忆能力。水迷宫实验结束后处死小鼠，以ELISA法检测小鼠脾细胞培养上清液中白细胞介素4(IL-4)和 干扰素γ(IFN-γ)水平，免疫组化染色法检测小鼠脑内Aβ斑的表达。结果p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗Aβ抗体水平高于p(Aβ3-10)10组〔(55.03±8.93)μg/mLvs.(27.32±7.69)μg/mL，t=-4.455，P<0.05〕，p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组抗体类型主要是IgG1型〔(50.64±6.96)μg/mL〕，明显高于p(Aβ3-10)10组〔(14.15±3.16)μg/mL，P<0.05〕。与p(Aβ3-10)10组比较，p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3组Morris水迷宫实验平均逃避潜伏期变短、穿越平台次数和穿越平台所在象限停留的时间比例明显增多(均P<0.05)；脾细胞培养上清液中IL-4水平增高〔(110.22±18.12)pg/mLvs.(170.12±22.16)pg/mL，P<0.05〕、IFN-γ水平减低〔(800.12±80.11)pg/mLvs.(640.12±70.53) pg/mL，F=6.152，P<0.05〕；脑内沉积的Aβ斑块明显减少(P<0.05)。结论补体C3d-p28分子佐剂使p(Aβ3-10)10-C3d-p28.3抗Aβ抗体的产生增加、Th2型免疫反应增强，转基因鼠空间学习记忆能力提高。

阿尔茨海默病；β淀粉样蛋白；DNA疫苗；C3d-p28分子佐剂； APP/PS1双转基因鼠

阿尔茨海默病(Alzheimer’s disease， AD)是一种神经系统变性疾病，其典型病理特征为细胞外老年斑(SP)和细胞内神经元纤维缠结(NFTs)的形成。Aβ免疫治疗可阻止Aβ产生、聚集和/或增加Aβ清除，被认为是治疗AD的有效治疗策略。作为安全、有效的Aβ主动免疫疫苗，不仅应具有治疗作用的抗Aβ抗体，避免Th1型细胞免疫反应，同时还需要具有减缓认知功能减退的作用。现有研究表明，C3d分子佐剂通过与B细胞表面的补体受体2(CR2)结合，诱发强烈的体液免疫反应[1]，可将免疫应答模式由Th1型向Th2型转变[2]。而p28分子是补体C3d分子与CR2特异性结合的结合域，p28分子与全长C3d分子有相似的佐剂性质[3]，但p28分子大小仅占C3d分子全长的9%[4]，这将更增强了DNA疫苗的有效利用。……