雷 杨，韩 宇

（1.通化市食品药品检验所，吉林 通化 134000；2.吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132000）

HPLC法测定胃痛丸中延胡索乙素的含量

雷 杨1，韩 宇2

（1.通化市食品药品检验所，吉林 通化 134000；2.吉林市食品药品检验所，吉林 吉林 132000）

胃痛丸由沉香、丁香、延胡索（醋炒）、姜半夏、当归等18味中药材组成，延胡索为主药。对治疗经闭痛经，产后瘀阻，跌扑肿痛有较好疗效。

胃痛宁丸；延胡索乙素；反向高效液相色谱法

1 资料与方法

1.1 仪器、试剂与标准物质

紫外-可见分光光度计：日本岛津UV-1700；高效液相色谱仪：戴安Ultimate3000、日立；对照品为延胡索乙素，对照品、试剂均在有资质的经销商处购买。

1.2 方法

1.2.1 仪器、试剂与标准物质

色谱柱：C18（4.6×250 mm，5 μm）；流动相：甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55：45）；检测波长、280 nm。

1.2.2 对照品溶液的制备

取延胡索乙素对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含46 μg的溶液，即得。

1.2.3 供试品溶液的制备

取本品研细，取约1.0 g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入浓氨试液-甲醇（1：20）混合溶液50 mL，称定重量，冷浸1小时后加热回流1小时，放冷，再称定重量，用浓氨试液-甲醇（1：20）混合溶液补足减失的重量，摇匀，滤过。精密量取续滤液25 mL，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得见图1、图2。

图1

图2

2 系统适用性试验

2.1 测定波长选择

取延胡索乙素对照品甲醇溶液，经UV-1700型紫外-可见分光光度计在250～300 nm范围内测定延胡索乙素在280.3 nm的波长处有最大吸收

2.2 流动相的选择

分别采用乙腈-0.1%冰醋酸溶液（60:40）、甲醇-0.1%冰醋酸溶液（55:45）、甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55：45）为流动相，结果以甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）（55：45）为流动相，保留时间适宜且色谱峰对称性好，主峰与杂质峰分离度大。溶剂在主峰保留时间处无色谱峰，不存在干扰。用二极管阵列检测器对色谱峰纯度进行检测，确定供试品中延胡索乙素为单一成分，故拟定标准选择甲醇-0.1%磷酸溶液（7:93）为流动相。

2.3 提取方法考察

供试品溶液提取溶剂的确定：

（1）方法为上述供试品提取方法

（2）取供试品1.0 g，加氨试液2 mL使湿润，精密加甲醇50 mL，称定重量，加热回流2小时，防冷，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，取续滤液作为供试品溶液。实验结果显示方法1提取完全，分离效果好。

2.4 提取时间考察

正文中提取时间为冷浸1小时后加热回流1小时，同时我们也考察了冷浸2小时，加热回流2小时，结果是正文中提取的杂质少，主峰含量高，故选冷浸1小时后加热回流1小时为该方法的提取时间。

3 方法学验证

3.1 线性

结果表明延胡索乙素在0.12519～1.3687 mg，线性关系良好。

3.2 精密度

数据显示，本方法精密度良好。

3.3 重复性试验

取同一供试品，依正文方法独立测定6份，数据显示本法重复良好。

3.4 准确度试验

取重复性试验同批次样品（含量：0.058 mg/g）6份，每份取约0.5 g，精密称定，再分别加入延胡索乙素对照品适量，按标准正文含量测定项下方法测定，计算回收率。实验结果表明，本方法回收率良好，该方法适合本品的含量测定。

3.5 稳定性考察

精密吸取同一供试品溶液5 μL，分别在0，2，8，12，16，22 h进样，计算峰面积的RSD值。结果表明供试品溶液在22h内稳定。

4 讨 论

我们对取样量、提取方法、流动相类型、流动相比例、提取溶剂、提取时间都进行了细致的考察，结果是按上述条件分离效果好，提取完全，含量高，方法相对简便。同时也考察了阴性和溶剂，确定无干扰。

[1] 马月光,岳显可,曹 岗,等.不同产地延胡索饮片炮制前后有效成分含量的测定[J].中药材,2013,36(11):1754-1756.

[2] 鲁春梅,张春森,姜立勇.延胡索化学成分及药理作用研究进展[J].中国现代药物应用,2011,5(15):126-127.

[3] 贺 凯,高建莉,赵光树.延胡索化学成分、药理作用及质量控制研究进展[J].中草药,2010,38(12):1909.

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ISSN.2095-8242.2017.069.13475.02

本文编辑：赵小龙