李相会 孙玲 孙健 张娜 吴红丽

无乳链球菌检测的影响因素及方法学改进*

李相会 孙玲 孙健 张娜 吴红丽

目的 针对无乳链球菌（GBS）检出率较低的情况，分析和查找实验前、实验中可能造成GBS检出率过低的原因，从而改进各环节的操作流程，更换高检出率培养皿，提高GBS的阳性检出率。方法 根据不同的改进环节将该实验研究数据分为4组。第1组：未改进操作流程；第2组：采样方法标准化；第3组：采集方法标准化后及时送检；第4组：采集方法标准化后及时送检，标本接种于高检出率培养基。通过回顾性实验研究，对4组标本的GBS阳性检出率进行比较。结果 第1组共采集标本1 210例，其中阳性标本28例，阳性率为2.3%；第2组共采集标本850例，阳性标本38例，GBS阳性检出率为4.5%；第3组共采集标本720例，阳性标本35例，GBS阳性检出率为4.9%；第4组共采集标本990例，其中阳性标本84例，GBS阳性检出率达到8.5%。除第2组与第3组间差异无统计学意义（P＞0.05）外，其余各组间差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论 改进操作流程后无乳链球菌阳性检出率明显提高，表明规范化操作、改进操作流程，对于提高GBS检出率具有重要意义。

无乳链球菌 影响因素 阳性检出率。

无乳链球菌又称B群链球菌（Group B Streptococci，GBS）是一种革兰阳性链球菌，以其细胞壁多糖类C物质属于Lancefield抗原结构分类中的B群而得名。GBS正常情况下寄居于妇女阴道和人体直肠隐窝处，逆行至宫腔可导致严重孕、产妇感染以及胎儿、新生儿死亡[1]。对于妊娠女性，该菌可感染羊水从而导致新生儿脓毒症、肺炎、脑膜炎等。新生儿早发型感染主要引起肺炎和败血症，是新生儿死亡的主要原因之一。而晚发型感染主要引起脑膜炎，可导致严重的神经系统后遗症及听力丧失等不可逆损害。GBS早已被西方国家列为围生期感染的首要病原菌之一[2]。目前国内对GBS的危害高度关注，许多医院均已开展了妊娠妇女GBS的筛查工作，秦皇岛市妇幼保健院对该菌的筛查工作已开展多年，但阳性检出率一直低于其他地区的报道。因此，查找GBS检出率的影响因素是该研究的主要目的，以指导临床提前预防用药，降低该菌对妊娠妇女及新生儿造成的危害。

对象与方法

1 对象 选取在秦皇岛市妇幼保健院产前检查的妊娠妇女，孕周在35～37周时采集标本，检测GBS。将研究对象分为4组，第1组为2015年2～5月采集的标本，为未改进操作流程的孕妇标本1 210例。采集方法：除去陈旧的阴道分泌物，用一次性无菌拭子取阴道下1/3阴道壁粘膜分泌物及肛周联合采样，标本采集后置无菌管中送检，标本接种于羊血营养琼脂平板。第2组为2015年6～8月采集的标本，依照标准化方法采集样本。采集方法：采样部位由原来采集阴道下1/3及肛周，改为阴道下1/3及直肠隐窝处，标本接种于羊血营养琼脂平板。第3组为2015年9～10月采集的标本，除采集方法标准化外，进一步规范送检时间，要求标本采集后立即送检，一般不超过1 h；标本接种于羊血营养琼脂平板。第4组为2015年10～12月采集的标本，在采集方法标准化和及时送检的基础上，规范接种流程，标本接收后及时接种，从取样到标本接种不超过2 h，将标本接种于血平板和GBS显色平板。

2 方法 根据各组的改进措施不同操作也各异。①采样部位：除第1组取材为阴道下1/3阴道壁粘膜分泌物及肛周联合采样外，其余各组采样为阴道下1/3及直肠隐窝处；②送检时间：除第1组为限制送检时间外，其余各组均要求采样后及时送检，一般不超过1 h；③接种时间：除第1、2组外，其余2组均要求标本及时接种，从取样到标本接种不超过2 h；④接种平板：除第4组增加接种了GBS显色平板外，其余各组只接种羊血琼脂平板。各组标本接种后置37℃、5%～10% CO2培养箱内，温育18～24 h，观察平板上菌落特点。在血平板上GBS菌落呈灰色、扁平、半透明或不透明、表面光滑、凸起、菌落干燥，呈不易乳化、β-溶血环；在GBS显色平板上菌落为红色或紫红色。选取可疑菌落进行涂片镜检，同时进行鉴定试验（包括触酶试验、杆菌肽试验、CAMP试验）。鉴定试验与无乳链球菌形态特征相符合者，第2日挑取分纯后单个菌落进行上机鉴定及药敏试验。

3 试剂及仪器 该实验所用培养皿为安图公司生产羊血营养琼脂平板和GBS显色平板，标准菌株为金黄色葡萄球菌ACTT29213，所用仪器为BD公司生产的PHONEX1000，所用培养肉汤及鉴定板均为BD公司原装进口配套试剂。

4 统计学处理 应用SPSS13.0软件，计数资料比较采用χ2检验。P＜0.05表示差异有统计学意义。

结 果

将检测标本根据改进措施中涉及到的不同影响因素分4组，第1组共采集标本1 210例，其中阳性标本28例，GBS阳性检出率为2.3%；第2组共采集标本850例，阳性标本38例，GBS阳性检出率4.5%。第3组共采集标本720例，阳性标本35例，GBS阳性检出率4.9%；第4组共采集标本990例，其中阳性标本84例，GBS阳性检出率8.5%。各组比较结果见表1。

表1 4组间无乳链球菌阳性检出率的比较

讨 论

正常寄居于女性阴道和人体直肠隐窝处的GBS分离率可达30%[3]，国外相关报道亦显示GBS的检出率可达10%～30%[4]，并且有文献报道，产前携带GBS的母亲，其新生儿该菌的分离率高达65%[5]。GBS可导致新生儿脓毒症、肺炎、脑膜炎，新生儿早发型感染主要引起肺炎和败血症，是新生儿死亡的主要原因之一。因此，提高妊娠妇女携带GBS的阳性检出率，可以有效指导临床更好的对产妇和新生儿尽早采取预防保护措施，降低产妇与新生儿的感染风险。国内有文献[6-8]报道，标本可接种于选择转运培养基或在增菌肉汤中增菌，对于提高阳性检出率具有一定的成效。转运培养基的作用主要适用于标本不能及时送检的情况，防止由于长时间温、湿改变而造成细菌死亡，减低检出率。而本院标本采集来源基本为门诊患者，能够保证及时送检，因此转运培养基的使用意义不大。增菌肉汤可抑制其他革兰阴性菌生长，适合目标菌的生长，有效提高GBS的检出，但与GBS专用显色培养基相比，增菌肉汤增菌后再进行菌落分纯及鉴定，所消耗的时间较长，不能有效满足临床需求。兼顾提高阳性检出率及缩短检测时间的考虑，本实验室从试验前、试验中的各操作环节进行了有效改进，同时引进了GBS显色培养基，使GBS阳性检出率由原来的2.3% 提高到8.5%。通过各组间的结果比较，发现每一个环节的改进对于提高GBS检出率均有一定的作用。其中第3组与第2组间的差异不具有统计学意义，可能因为标本送检环节、在控制前存在的问题不是很明显，标本基本都能按要求送达，但是经过控制后，GBS阳性率还是有了一定的提高，所以也不排除该因素对GBS检出率的影响。而采样部位与培养基的选择对于GBS检出率则有非常明显的影响。通过各项举措使GBS检出率有了大幅度的提升，与其他地区报道[7-10]的阳性率基本一致或高于某些地区。通过对各项影响因素的研究，改进了操作流程后，提高了本实验室GBS的检测水平，可有效指导临床预防性用药，降低产妇及新生儿的感染机率。

1 黄醒华，张为远．中华围产医学［M］．北京：人民卫生出版社，2012：76-77.

2 American Academy of Pediatrics Committee on Infectious Dis-eases and Committee on Fetus and Newborn. Evised guidelinds for prevention of early-onset group B Streptococcal（GBS）infection[J].Pediatrics，1997，99（3）：489-496.

3 陈东科，孙长贵.实用临床微生物学检验与图谱[M].北京：人民卫生出版社，2011：208.

4 American Academy of Pediatrics Committee on Infectious Dis-eases and Committee on Fetus and Newborn.Revised Guidelinds for prevention of earlyonset group B Streptococcal (GBS) infection [J].Pediatrics，1997，99（3）：489-496..

5 Anthony B F，Okada D M，Hobel C J.Epidemiology of group B Streptococcus：longitudinal observations during pregnancy[J].J Infect Dis，1978，137（5）：524-530.

6 王辉，任健康，王明贵，主编.临床微生物学检验[M].北京：人民卫生出版社，2015：348.

7 李相新，郑芬，张玲华，等.女性生殖道B群链球菌显色培养法筛查与耐药性分析研究[J].中华医院感染学杂志，2015，25（19）：4379-4381.

8 陆庭嫣，沈俐，唐振华.不同培养基及B族链球菌增菌肉汤检测B族链球菌效果评价[J].检验医学，2015，30（9）：890-893.

9 .王丽，叶巍，马杰. 实时荧光PCR技术和细菌培养法检测妊娠晚期孕妇定植B群链球菌临床分析[J].国际检验医学杂志，2014，35（16）：2220-2221.

10 曾选.江西1 019例孕妇生殖道B群链球菌感染情况分析[J].中国妇幼保健，2014，29（27）：4457-4459.

R378.1+2

A

1671-2587（2017）06-0609-03

10.3969/j.issn.1671-2587.2017.06.023

*本课题受秦皇岛市科技局计划项目（No.201602A100）资助

066000 河北省秦皇岛市妇幼保健院检验科

李相会（1973–），女，河北秦皇岛人，副主任检验技师，学士，主要从事临床检验工作，（E-mail）rhxin1024@163.com。

吴红丽，女，主要从事临床检验工作，

（E-mail）fybjyjyk@sina.com。

2017-06-22 ）

（本文编辑：王敏）