王晓源，韩翠翠，肖洪彬*

（1.黑龙江中医药大学 ，哈尔滨 150040 ； 2.齐齐哈尔医学院 ， 黑龙江 齐齐哈尔 161000）

复方胡黄连对D-半乳糖致急性肝损伤的保护作用及机制

王晓源1，韩翠翠2，肖洪彬1*

（1.黑龙江中医药大学 ，哈尔滨 150040 ； 2.齐齐哈尔医学院 ， 黑龙江 齐齐哈尔 161000）

目的 探讨复方胡黄连对D-半乳糖致急性肝损伤的保护作用及机制。方法 昆明种小鼠60只，随机分为空白对照组， 模型对照组，阳性对照药肝加欣组（545 mg/kg），复方胡黄连高（34 mg/kg）、中（17 mg/kg）、低（8.5 mg/kg）剂量组,每组 10只，连续灌胃7 d，于第7天早6:00灌胃给药，2 h后造模，除空白对照组外，其余各组腹腔注射0.1%D-半乳糖，体积为0.3 mL/10 g，24 h后摘眼球取血，用全自动生化分析仪测定ALT、AST，取出肝脏组织，根据试剂盒的要求测定SOD、MDA的含量。结果 复方胡黄连对D-半乳糖致小鼠急性肝损伤的治疗，模型组与空白组比较，其血清ALT和AST均明显升高（p＜0.01），肝组织中SOD显著降低，MDA含量显著升高。复方胡黄连各给药组与模型组比较，均能显著降低血清ALT和AST含量（p＜0.01），升高肝组织中SOD活性，降低MDA含量（p＜0.01），改善其损伤的病理结构。结论 复方胡黄连对D-半乳糖致小鼠急性肝损伤的治疗，能显著降低血清ALT、AST活性，升高肝组织中SOD含量，降低MDA含量。

复方胡黄连 ；急性肝损伤； 保护作用

肝损伤并不是一个独立的病名，而是一种病理改变，是各种肝病在疾病发展过程中的一个共同的病理环节。随着化学药物的应用和科学的发展，人们逐渐认识到药物对肝脏的损害[1]， 中医古籍中虽无“肝损伤”的病名，但以现代医学对肝损伤的临床表现（黄疸、发热、纳差、乏力、右胁部疼痛等），似可归属于中医“黄疸”“胁痛”之范畴。

1 材料与方法

1.1 材料 昆明种小鼠，18～24 g，雌雄各半。合格证为SCKK（黑）2008004，由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。复方胡黄连，由黑龙江中医药大学药学院中药化学教研室提供，为棕色粉末，1 g药粉含10 g生药。肝加欣片，中国吉林通化方大药业有限公司提供，吉卫药准字（1996）第431628号，批号：0l0513X03541。丙氨酸氨基转移酶试剂盒（上海长征公司生产 091141.200904），草氨酸氨基转移酶试剂盒 （上海长征公司生产 090581.200907），SOD试剂盒（南京建成生物制品有限公司生产 20080924），MDA试剂盒 （南京建成生物制品有限公司生产20090916），考马斯亮蓝 （南京建成生物制品有限公司生产 20090826），D-半乳糖 （sigma），0.9%氯化钠（哈尔滨三联药业有限公司 080228A）。全自动生化分析仪法国生产 （Glamour 2000），2135型轮转式切片机（德国莱卡公司生产），722型分光光度计（山东高密仪器厂生产），透射电子显微镜（荷兰飞利浦公司生产），光学显微镜（Nikon），离心机（上海医用分析仪器厂），水浴锅（上海医用分析仪器厂），电子匀浆机（上海医用分析仪器厂）。

1.2 方法 取60只昆明种小鼠，体质量18～22 g，雌雄各半。分为6组：空白对照组、模型对照组、阳性对照药肝加欣组（545 mg/kg）、复方胡黄连高剂量组（34 mg/kg）、复方胡黄连中剂量组（17 mg/kg）、复方胡黄连低剂量组（8.5 mg/kg）。灌胃给药1次/d，正常对照组、模型对照组给予同体积蒸馏水，连续给药7 g，于第6天晚间11:00禁食，不禁水，于第7天早6:00灌胃给药2 g后造模。 除空白对照组外，其余各组腹腔注射0.1% D-半乳糖，体积为0.3 mL/10 g。

1.3 指标测定 24 h后摘眼球取血，取离心血清用全自动生化分析仪测定ALT、AST，同时将动物处死，取出肝脏组织，称0.5 g肝脏组织用生理盐水配制成10%的组织匀浆，根据试剂盒的要求测定SOD、MDA的含量。

1.4 统计学方法 实验数据以均数±标准差（x±s）表示，各组间数据比较均采用Excel和 SPSS 17.0统计软件进行方差分析，作图采用Excel作图工具。

2 结果

2.1 对D-半乳糖致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST的影响 见表1。

表1 对D-半乳糖致小鼠急性肝损伤血清ALT、AST的影响（x± s） U/L

2.2 对D-半乳糖致小鼠急性肝损伤肝组织中SOD、MDA的影响 见表2。

表2 复方胡黄连对D-半乳糖致小鼠急性肝损伤肝组织中SOD、MDA的影响（x±s）

3 讨论

ALT、AST作为肝细胞内酶，在氨基酸的合成与分解代谢中起重要作用。当肝组织受到急性损伤或细胞膜通透性增加时，2种酶大量释放到血液中，使血清中酶的活性显著增高。除了肝外脏器病变的情况导致（如急性心肌梗死、心肌炎等）血清内转氨酶升高外，发生急性肝损伤时，血清ALT、AST升高幅度能反映肝细胞坏死程度[2]。在轻、中度肝损伤时，以ALT升高较为明显，ALT升高远大于AST升高；当严重肝细胞损伤时，线粒体受损，可导致线粒体内的酶被释放入血，此时以AST升高更明显，血清中AST/ALT比值升高。本实验中D-gal从染毒后，血清ALT和AST活性明显升高，ALT由（30.40±12.91）U/L升高至（61.19±15.62）U/L，AST由（99.56±23.92）U/L升高至（201.45±26.25）U/L，提示造模成功，肝脏发生了急性损伤，且AST比ALT升高更为显著，说明模型肝损伤较为严重，这一结果与王鸿利[3]在《实验诊断学》中的描述相一致。模型组与空白组比较，其血清ALT和AST均明显升高（p＜0.01），说明D-半乳糖引起肝内生成二磷酸尿苷半乳糖，使尿苷酸的生成减少，继而引起核酸、糖蛋白和糖脂等物质减少，限制了细胞器的再生及酶的生成和补充，细胞器受损，肝细胞的结构和功能均出现异常，致使血清ALT、AST水平显著升高。

肝损伤是多因素参与的复杂过程，自由基和脂质过氧化在肝损伤中起着十分重要的作用[4]。自由基是机体正常化过程的中间产物，在机体正常及病理过程中都存在。脂质过氧化（LP）是自由基（FR）引起的一系列的反应，机体内存在着大量多聚不饱和脂肪酸（PUFA），极易受到氧化作用的损伤，产生有细胞毒性的脂质过氧化物，如丙二醛（MDA）等。同时，机体在进化过程中获得了灭活氧自由基的一些酶，如超氧化物歧化酶（SOD）、一氧化氮（NO）等，SOD和NO的变化可以间接地反应疾病情况下自由基的变化，MDA的含量能反映肝细胞膜脂氧化的强弱和细胞受自由基攻击的程度和肝脏的损伤程度[3-4]。

本病病机为湿热相搏，故立清肝胆湿热之法，湿热得清，则诸症自除；同时由于肝经之热，易耗阴血，因此，在清肝胆湿热的同时，还要固护肝之阴血。方中胡黄连[5]为君药，味苦性寒，主入肝、胆、胃、大肠经， 泻肝经湿热。同时胡黄连又具有利胆退黄之能，以之为君，使湿热清、黄疸退；肝为刚脏，主疏泄，肝经湿热，疏泄失职，而引起脾胃运化失常，胡黄连能清肝胆之湿热，恢复肝脏之正常疏泄，有利于恢复脾胃的正常运化升降之职，使脾运健则湿无以生；清热除湿，两擅其功。白芍为臣药，酸苦微寒，归肝脾经，能敛阴养血、柔肝止痛；肝藏血，体阴而用阳，肝经之热必然灼烁肝阴，故用白芍，养肝之阴血，胡黄连苦燥易伤阴血，故用白芍既养己伤之阴血又防胡黄连苦燥伤阴，肝木克土可致腹痛，用白芍缓急止痛，实为臣佐之药。清热燥湿易伤阴血，滋阴又有助湿之弊，胡黄连与白芍合用，清热燥湿而不伤阴血，滋阴而不碍邪，君臣相配，共奏清肝胆之湿热，养血敛阴，柔肝止痛之效。

本实验结果显示，D-半乳糖诱发肝损伤后，模型组肝组织SOD由（171.44±39.30）U/mg降至（122.96±36.72）U/mg，MDA由（14.18±0.4）nmol/mg升至（20.97±0.72）nmol/mg，均变化明显（p＜0.05），说明造模成功，小鼠肝脏发生了脂质过氧化反应。其中SOD明显降低，表明D-半乳糖引起肝损伤的机制与膜脂质过氧化有关。SOD作为体内重要的抗氧化酶，是超氧阳离子自由基的清除剂，可抑制自由基启动的脂质过氧化反应，肝细胞受到自由基攻击时SOD[6]可因其耗竭而减少[7]；MDA是其发生脂质过氧化的主要降解产物，严重损伤肝细胞膜结构，导致肝细胞肿胀、坏死，其含量反映了体内脂质过氧化的水平，也作为损害因子对机体进行损伤[8]。

[1]肖小河,李秀惠,朱云,等.中草药相关肝损伤临床诊疗指南[J].临床肝胆病杂志, 2016, 32(5):835-843.

[2]蔡琦,闫魏魏,王少坤,等.蛹虫草多肽对大鼠急性酒精性肝损伤的保护作用[J].临床肝胆病杂志, 2016, 32(4):669.

[3]王鸿利.实验诊断学[M].北京:人民卫生出版社, 2005:49.

[4]于乐成,茅益民,陈成伟.药物性肝损伤诊治指南[J].临床肝胆病杂志, 2015, 31(11):1752-1769.

[5]ANANDAN R, DEVAKI T. Hepatoprotective effect of Picrorrhiza kurroa on tissue defence system in D-galactosamineinduced hepatitis in rats[J]. Fitoterapia, 1999, 70(1): 54.

[6]MIRANDA-MENDEZ A, LUGO-BARUQUI A, ARMENDAR IZ-BORUNDA J. Molecular basis and current treatment for alcoholic liver disease[J]. International Journal of Environmental Research and Public Health, 2010, 7(5): 1872.

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Protective effect and mechanism of compound Figwort fl ower Picrorhiza Rhizome on acute liver injury induced by D-galactose

WANG Xiaoyuan1, HAN Cuicui2, XIAO Hongbin1*
(1. Heilongjiang University of Chinese Medicine, Harbin 150040, China;2. Qiqihar Medical University, Qiqihar 161000, Heilongjiang Province, China)

Objective To explore the protective effect and mechanism of compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome on the acute liver injury induced by D-galactose. Methods Sixty Kunming rats were randomly divided into blank control group, model control group, positive control group (545 mg/kg) of liver with jiaxin tablets, compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome high dose group (34 mg/kg), compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome medium dose group (17 mg/kg), compound Figwortf l ower Picrorhiza Rhizome low dose group (8.5 mg/kg). There were 10 rats in each group, consecutive lavage for seven days. Give the tablets at 6 a.m. on the seventh day and mold in 2 hours. In addition to the blank group, the other groups were injected with 0.1% D-galactose, 0.3 mL/ 10g, and the blood was taken after 24 hours, with automatic biochemical analyzer determination of ALT, AST, remove the liver tissue, according to the requirement of the kit for determining the content of SOD, MDA. Results Compared with blank group, the serum levels of ALT and AST in model group were signif i cantly increased (p＜0.01), SOD in the liver tissue decreased significantly, the MDA content increased significantly. Compound Figwortflower Picrorhiza Rhizome each dosage group compared with model group, can significantly reduce serum ALT and AST levels (P＜0.01), increase SOD activity in liver tissue, reduce MDA content (P＜0.01), pathological structure to improve its damage. Conclusion The treatment of acute liver injury induced by compound Figwortf l ower Picrorhiza Rhizome to rats with D-galactose, which can signif i cantly reduce the serum ALT and AST activity, can signif i cantly increase SOD content in liver tissues and decrease MDA content.

compound Figwortf l ower Picrorhiza Rhizome; acute liver injury; protection mechanism

R285.5

A

2095-6258(2017)06-0890-03

10.13463/j.cnki.cczyy.2017.06.010

黑龙江省教育厅科学技术研究项目（12541737）。

王晓源（1977-）,女，副教授,在站博士后,主要从事中药抗衰老的实验研究。

*通信作者：肖洪彬,男，教授,博士研究生导师,电子信箱- herxiaohongbin@126.com

2016-07-06）