魏爱丽＊，龙 隆＊，李 微，丁 锐，陈 伟，王莉莉

（1.抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京 100850；2.军事医学科学院毒物药物研究所，北京 100850）

基于细胞高内涵分析表征氮芥HN-3的细胞毒性

魏爱丽1，2＊，龙 隆1，2＊，李 微1，2，丁 锐1，2，陈 伟1，2，王莉莉1，2

（1.抗毒药物与毒理学国家重点实验室，北京 100850；2.军事医学科学院毒物药物研究所，北京 100850）

目的研究氮芥HN-3对不同来源细胞的毒性表型特征。方法HN-3 100，300和450 μmol·L-1分别作用于原代人胚表皮角质细胞（HEKf），原代成人皮肤成纤维细胞（HDFa）和人肺成纤维细胞（HLF）0.5，2，4，6，8，24和48 h后，采用基于细胞成像的多参数分析技术，检测HN-3对细胞存活、细胞核、细胞骨架（微丝和微管）、线粒体膜电位（MMP）、氧化应激、核膜通透性（NMP）、磷酸化组蛋白、溶酶体、自噬、细胞周期和凋亡等参数的影响。结果HN-3引起不可逆性的细胞损伤，表现为存活细胞数量显著减少（P＜0.01）。在存活细胞数量显著减少前，从0.5 h开始，细胞内活性氧和磷酸化组蛋白水平即显著升高，谷胱甘肽含量显著降低（P＜0.01）。HEKf细胞内溶酶体在0.5 h时减少，而HDFa和HLF细胞内溶酶体则分别在0.5和2 h升高，并伴有微管相关蛋白1轻链3B（LC3B）蛋白表达升高。伴随存活细胞数量减少，HEKf细胞核亮度升高，核面积减少，微丝、微管亮度和面积减少，MMP显著降低（P＜0.01），溶酶体亮度有增加趋势；与此相反，HDFa和HLF细胞表现为核面积增加，微丝、微管亮度和面积增加，MMP显著升高（P＜0.01），但溶酶体亮度增加，且HLF细胞LC3B的含量显著升高（P＜0.01）；同时，3种细胞均有NMP增高和锰超氧化物歧化酶含量增加，G2期阻滞。此外，HEKf细胞出现早期和晚期凋亡，HDFa细胞出现早期凋亡。结论HN-3诱发早期的细胞损伤效应包括DNA损伤、氧化胁迫和溶酶体损伤，晚期导致MMP失衡、NMP增加、G2期细胞周期阻滞；……