田路路，孟庆玲，乔 军，于伟伟，孟 丹，李重阳，才学鹏 ，陈创夫

(1.石河子大学 动物科技学院， 新疆石河子 832003； 2.中国农业科学院 兰州兽医研究所， 兰州 730046)

绵羊肺炎支原体延伸因子EF-P基因的克隆、表达及其重组蛋白免疫原性研究

田路路1，孟庆玲1，乔 军1，于伟伟1，孟 丹1，李重阳1，才学鹏2，陈创夫1

(1.石河子大学 动物科技学院， 新疆石河子 832003； 2.中国农业科学院 兰州兽医研究所， 兰州 730046)

为筛选绵羊肺炎支原体(MO)免疫相关蛋白，以MO新疆流行株基因组DNA为模板，通过PCR扩增其EF-P基因，测序后对其编码蛋白进行分子特征分析；用生物信息学软件预测其抗原表位集中区编码片段；进一步将该基因片段克隆入pET-32a(+)中，构建原核表达载体pET-32a(+)-EF-P，将pET-32a(+)-EF-P质粒转化至感受态细胞EscherichiacoliBL21(DE3)中，IPTG诱导目的蛋白表达后，检测重组蛋白反应原性和免疫原性。SDS-PAGE结果显示，EF-P重组蛋白分子质量为29.5 ku；Western blot结果显示，该重组蛋白可被MO阳性血清特异性识别，证实其具有良好的反应原性；小鼠免疫试验结果显示，该重组蛋白可诱导机体产生特异性抗体，采用正向间接血凝方法检测效价可达1∶64，提示其具有较强的免疫原性。

绵羊肺炎支原体；EF-P；克隆；表达；免疫原性

绵羊肺炎支原体(Mycoplasmaovipneumoniae, MO)是绵羊呼吸道疾病的重要致病菌之一，也可引起山羊呼吸道疾病[1-2]，其定殖于呼吸道黏膜表面，可引起呼吸道感染，并导致咳嗽、呼吸困难和生长不良，还可引起免疫抑制现象[3]。该病已广泛分布于世界各地，给养羊业造成重大的经济损失[4-5]。目前，疫苗免疫接种已被证实是一种有效防控MO感染的主要手段。……