牟云+汪文伦+许万云+胡梦薇+王丹+严国+王会敏+高剑峰

摘要：为获得人乳铁蛋白的沙漠小球藻（Chlorella sp. GTD8A1）的表达系统和稳定的小球藻GTD8A1-hLF工程藻种，将人乳铁蛋白基因导入小球藻细胞中进行表达鉴定。以人血cDNA为模板，RT-PCR扩增得到人乳铁蛋白基因（GenBank登录号NM-002343.4），经KpnⅠ和XbaⅠ双酶切后，连接到植物表达载体pCAMBIA2300-35S-OCS中，获得重组质粒载体pCAMBIA2300-35S-hLF-OCS，将重组质粒电击转入GTD8A1中，通过菌落PCR鉴定后扩大培养，在DNA和RNA水平分析人乳铁蛋白基因的整合和转录，SDS-PAGE和Western Blot分析获得70 ku的目的蛋白；将转基因藻种（GTD8A1-hLF）在BBM培养基中进行培养周期优化。结果表明，重组人乳铁蛋白在沙漠小球藻细胞中表达成功；通过Elisa测其人乳铁蛋白表达量在20 d时达到最大，浓度为13.28 mg/L。

关键词：小球藻；人乳铁蛋白；表达系统；SDS-PAGE；Western Blot；构建；鉴定

中图分类号： S188 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）19-0138-05

收稿日期：2016-05-06

基金项目：国家自然科学基金（编号：31460276）。

作者简介：牟 云（1992—），女，四川华蓥人，硕士研究生，从事可再生能源的开发与利用相关研究。E-mail：1171534413@qq.com。

通信作者：高剑峰，教授。E-mail：jianfengg@shzu.edu.cn。 新疆古尔班通古特沙漠位于准噶尔盆地的中央，是我国第二大沙漠和面积最大的固定、半固定沙漠。年降水量70～150 mm，冬季有积雪，春季和初夏降水略多，冬季最低地表温度可达-25 ℃，夏季最高地表温度可达30 ℃[1]。生长在此的小球藻及其他藻类与高等植物经过百万年的进化，已经完全适应了沙漠的极端环境。从20世纪80年代末开始，对沙漠微藻的研究与开发受到国内外研究者的重视[2]。研究表明，在新疆沙漠中生长着百余种藻类，小球藻是其中重要的组成部分[3]。……