刘威+袁芳艳+周丹娜+刘泽文+杨克礼+段正赢+郭锐+蔡行+肖少波+田永祥

摘要：试验构建猪肺炎支原体重组表达质粒pET30a-LppT，通过快速定点突变试剂盒将LppT基因中513、945、1 860、2 547 bp处的A突变为G，使改造后的LppT基因能在大肠杆菌系统中正确表达，IPTG诱导重组蛋白的表达并进行了蛋白纯化，纯化的目的蛋白与佐剂混合、乳化制备免疫原，免疫新西兰大白兔制备LppT蛋白多克隆抗体。SDS-PAGE 分析结果显示，IPTG诱导表达后获得1条特异性蛋白条带，分子质量约为110 ku，与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白以可溶形式表达于上清中，纯化的蛋白经SDS-PAGE分离后，用制备的LppT多克隆抗体进行Western Blot检测，结果表明制备的LppT多克隆抗体具有较强的特异性。

关键词：猪肺炎支原体；脂蛋白；LppT；多克隆抗体

中图分类号： S858.28 文献标志码： A 文章编号：1002-1302（2017）19-0220-04

收稿日期：2016-05-27

基金项目：国家重点研发计划（编号：2016YFD0500906）；国家自然科学基金（编号：31502069、31170160）；湖北省农业科学院青年科学基金（编号：2015NKYJJ14）；湖北省农业科学院竞争性计划项目（编号：2016jzxjh030）；湖北省农业科技创新中心资助项目（编号：2015-620-004-001）。

作者简介：刘 威（1985—），男，湖北武汉人，博士，助理研究员，主要从事动物传染病研究工作。E-mail：liuwei85@126.com。

通信作者：田永祥，研究员，主要从事家畜主要疫病生物制剂的研制及综合防控技术研究。E-mail：tyxanbit@163.com。 猪支原体肺炎（mycoplasmal pneumonia of swine，MPS）是由猪肺炎支原体（Mycoplasma hyopneumoniae，Mhp）引起的，以猪咳嗽和气喘为主要症状的慢性呼吸道传染病[1]，具有慢性、接触性、高传染性、高发病率和低死亡率的特征。该病广泛分布于世界各地，国外常被称为猪地方流行性肺炎，而在我国常被称为猪气喘病（又称喘气病）[2]。……