邹 勇， 林哲生， 陈玉婵， 廖思红， 袁 青， 林东军, 2△

(中山大学附属第三医院 1输血科， 2血液科， 广东 广州 510630)

过表达B7-H6在自然杀伤细胞介导的肝细胞凋亡中的作用*

邹 勇1△， 林哲生1， 陈玉婵1， 廖思红1， 袁 青1， 林东军1, 2△

(中山大学附属第三医院1输血科，2血液科， 广东 广州 510630)

目的探讨过表达B7同源物6(B7-H6)在自然杀伤(NK)细胞介导的肝细胞凋亡中的作用。方法设计针对B7-H6全长的寡核苷酸引物，经PCR扩增调取B7-H6全长，并将其亚克隆入线性化的真核表达载体pIRES2-EGFP，构建重组B7-H6过表达载体pIRES2-EGFP-B7-H6，通过双酶切、PCR及测序进行鉴定。利用脂质体将pIRES2-EGFP-B7-H6重组质粒转染正常肝细胞系L02，采用荧光显微镜观察EGFP的表达，流式细胞技术检测转染效率，qRT-PCR 和Western blot 检测B7-H6 mRNA 和蛋白的表达水平。将转染pIRES2-EGFP-B7-H6重组质粒的L02细胞与NK-92细胞以不同的效靶比共培养，利用CCK-8实验分析检测NK-92细胞对L02细胞的杀伤效应。结果经PCR、酶切及测序等方法证实成功构建pIRES2-EGFP-B7-H6过表达载体；经脂质体转染L02细胞48 h后，在荧光显微镜下观察到较强绿色荧光表达，流式检测显示转染效率达到92.6%；qRT-PCR和Western blot结果显示L02细胞B7-H6的mRNA和蛋白高表达；CCK-8实验证实相对于转染空载体pIRES2-EGFP， NK-92细胞对转染了pIRES2-EGFP-B7-H6的L02细胞的杀伤活性显著增强(P<0.05)。结论成功构建过表达B7-H6的真核表达载体pIRES2-EGFP-B7-H6，并进一步证实NK-92细胞对过表达B7-H6的L02细胞具有显著的杀伤效应。

B7同源物6； 真核表达载体； 自然杀伤细胞； 肝细胞； 细胞凋亡

B7同源物6(B7 homologue 6, B7-H6)又称自然杀伤细胞细胞毒性受体3配体1(natural killer cell cytotoxicity receptor 3 ligand 1，NCR3LG1)，属于B7免疫球蛋白超家族，是近年来利用生物信息学和质谱技术等发现的新型共刺激分子。已经证实，B7-H6为人类自然杀伤(natural killer，NK)细胞的配体，可以与NK细胞表面细胞毒性受体NKp30特异性结合而激活并促进NK细胞释放TNF-α和IFN-γ，从而杀伤靶细胞[1-3]。……