刘美快， 袁哲英， 黄凯西， 李 慧， 姜海丹， 陈 斌

(温州医科大学附属第一医院超声科， 浙江 温州 325000)

低强度超声联合微泡通过提高ROS水平促进甲状腺癌细胞自噬性死亡*

刘美快， 袁哲英， 黄凯西， 李 慧， 姜海丹， 陈 斌△

(温州医科大学附属第一医院超声科， 浙江 温州 325000)

目的探讨低强度超声联合微泡造影剂对甲状腺癌细胞自噬性死亡的作用，并分析自噬的激活机制及其对细胞活力的影响。方法采用频率20 kHz、功率80 mW的低强度超声联合微泡造影剂处理人甲状腺癌TPC1细胞，处理细胞60、120和240 s后，采用Live/Dead 实验和CCK-8实验分析细胞死亡和活力；Western blot分析微管相关蛋白1轻链3Ⅱ(microtubule-associated protein 1 light chain 3-Ⅱ，LC3-Ⅱ)、自噬相关蛋白5(autophagy-related protein 5，ATG5)和SQSTM1/P62的蛋白水平变化；单丹磺酰戊二胺(monodansylcadaverine，MDC)染色、绿色荧光蛋白(green fluorescent protein，GFP)-LC3转染和透射电镜观察细胞内自噬体的数量；2′, 7′-二氯二氢荧光素二乙酸脂(DCFDA)染色分析细胞活性氧簇(reactive oxygen species，ROS)的水平，用N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-L-cys-teine，NAC)抑制氧化应激水平，分析ROS在自噬激活中的作用；ATG5 siRNA转染抑制自噬水平并分析自噬性死亡的作用。结果低强度超声联合微泡显著促进TPC1细胞死亡，抑制TPC1细胞活力(P<0.05)，并与处理时间显著相关。相对于单纯低强度超声组和微泡组，超声联合微泡显著升高LC3-Ⅱ和ATG5蛋白水平，抑制P62蛋白水平(P<0.05)。MDC染色、GFP-LC3转染和透射电镜观察发现，超声联合微泡明显增加TPC1细胞中自噬体的数量。超声联合微泡与单纯低强度超声组和微泡组相比，提高了细胞的ROS水平，而NAC显著降低超声联合微泡提高的LC3-Ⅱ蛋白水平(P<0.05)。ATG5 siRNA抑制自噬并显著增加细胞活力(P<0.05)。结论本研究说明低强度超声联合微泡可能通过提高甲状腺癌细胞中的ROS水平促进细胞的自噬性死亡，从而引起甲状腺癌细胞死亡。

甲状腺癌； 低强度超声； 微泡； 自噬； 活性氧簇

甲状腺癌是最常见的内分泌系统恶性肿瘤，近来其发病率快速上升，在中国城市居民所有的恶性肿瘤中排名第十[1]。虽然手术治疗和放射性碘治疗对大多数的甲状腺癌具有较好的效果，但是不同的病理类型、晚期、放射性碘耐受及复发和转移导致其在临床的处理上仍较为棘手[2-3]。近年来，低强度超声(low-intensity ultrasound，LIUS)在肿瘤治疗中逐渐得……