朱小甫，吴旭锦

（咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所 动物疫病分子生物学诊断实验室，咸阳 712000）

利用M基因鉴别新城疫病毒中强毒株与弱毒株RT-nPCR方法的建立

朱小甫，吴旭锦

（咸阳职业技术学院畜牧兽医研究所 动物疫病分子生物学诊断实验室，咸阳 712000）

根据GenBank上公开的新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）基因序列，针对M基因差异位点设计了3对引物，通过优化反应体系与条件，建立了能够区分NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR检测方法。特异性试验显示，NDV中强毒株扩增出543、375 bp两个条带，弱毒株仅出现375 bp一个条带，其他常见禽病毒为阴性。灵敏度试验结果表明，该方法检测cDNA含量极限为6.15×10-4ng/μL。临床样品检测发现鸡群NDV弱毒带毒率高，中强毒株带毒率较低。结果表明，本研究成功建立了一种基于M基因的快速鉴别诊断NDV中强毒株与弱毒株的RT-nPCR方法。

新城疫病毒；中强毒株；弱毒株；M基因；鉴别诊断

新城疫（newcastle disease，ND）是一种禽类烈性传染病，感染率高，死亡率高，对多种家禽和野禽均有致病性，广泛分布于世界各地[1]。新城疫病毒（Newcastle disease virus，NDV）为副黏病毒科、禽腮腺炎病毒属病毒，其核酸为单股负链不分节段的RNA[2]。由于新城疫对养禽业可造成巨大的经济损失，我国农业部将其定为一类动物疫病。

准确诊断是防控新城疫的前提，对扑灭疫情、减少经济损失有重要意义。国标《新城疫诊断技术》（GB/T16550-2008）中诊断方法有临床诊断、病毒分离鉴定、血凝-血凝抑制试验和反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）[3]。其中RT-PCR技术具有灵敏度高、特异性好、快速准确的优点，国内学者设计了多种RT-PCR检测方法，并进行了临床应用[4]。……