赵小惠，李 琛，张 华，郑铭喆，季延红 （西安交通大学医学部基础医学院病原生物学和免疫学系，陕西西安710061）

淋巴细胞特有重组激活基因蛋白载体构建及功能鉴定

赵小惠，李 琛，张 华，郑铭喆，季延红 （西安交通大学医学部基础医学院病原生物学和免疫学系，陕西西安710061）

目的：淋巴细胞特异性重组激活基因（RAG）蛋白1和2共同组成的RAG重组酶是造成淋巴细胞发育及产生抗体多样性的关键性蛋白.本研究构建并优化同时表达RAG1和RAG2的慢病毒载体，为研究RAG1和RAG2的结构和功能奠定基础.方法：构建同时表达RAG1、RAG2和绿色荧光蛋白（GFP）的载体；Western Blotting验证该载体RAG1和RAG2蛋白表达；体外重组实验证实该载体表达的RAG蛋白具有催化断裂DNA的功能.结果：构建了表达RAG重组酶的载体pWPI⁃RAG2⁃P2A⁃RAG1⁃IRES⁃GFP；Western Blotting验证了该载体表达RAG1和RAG2蛋白，并显示该载体RAG1和RAG2蛋白的表达量具有较高的一致性.体外重组实验证实该载体表达的RAG1和RAG2组成的重组酶具有更好的催化断裂DNA的活性.结论：优化后的pWPI⁃RAG2⁃P2A⁃RAG1⁃IRES⁃GFP载体可以保证RAG1和RAG2同时有效表达，GFP可作为荧光标记，为后续细胞以及动物实验奠定基础.

载体优化；重组激活基因蛋白；P2A序列；绿色荧光蛋白（GFP）

0 引言

哺乳动物免疫应答主要依赖于B或T淋巴细胞在发育过程中通过基因重排产生多样性的免疫球蛋白（immunoglobulins，Igs）或T细胞受体（T⁃cell receptors，Tcrs）分子.Igs和Tcrs分别包括Igh、Igκ、Igλ和Tcrβ、Tcrα、Tcrδ、Tcrγ7个抗原受体基因位点.每个抗原受体基因在淋巴前体细胞或非淋巴细胞中以无翻译表达蛋白功能的胚系基因片段簇形式存在，表现为每个基因位点的5'端含……