杨升++宫鹏涛++李建华++吕强++杨举++李赫++张西臣

摘 要：利用新孢子虫感染小鼠血清对新孢子虫cDNA表达文库进行SEREX筛选，获得的阳性克隆经测序后进行Blast分析，并利用生物学软件对其编码的蛋白结构进行预测。结果显示，经筛选共获得了4个阳性克隆序列，分别为新孢子虫表面抗原SAG1，两个假定蛋白（XM_003882171.1）和（XM_003882600.1），以及一个未命名蛋白（XM_003885351.1）。研究共获得了4个新孢子虫免疫相关蛋白，为新孢子虫诊断及其疫苗研究等研究奠定了基础。

关键词：犬新孢子虫；cDNA表达文库；免疫相关蛋白；筛选

中图分类号：R382.9 文献标识码：A DOI 编码：10.3969/j.issn.1006-6500.2017.10.001

Screening on Immune Associated Protein of Neospora caninum and Its Analysis of Biological Information

YANG Sheng1，2， GONG Pengtao1， LI Jianhua1， LYU Qiang1，YANG Ju1 ， LI He1， ZHANG Xichen1

（1.College of Veterinary Medicine，Jilin University， Changchun， Jilin 130062， China； 2. College of Animal Science and Veterinary Medicine， Tianjin Agricultural University， Tianjin 300384， China）

Abstract：By SEREX， the cDNA expression library of Neospora caninum were screened using mice serum infected with Neospora caninum. The positive clones were sequenced and analyzed by the biology software. The results showed that four positive clones sequence were obtained which were one surface antigen SAG1 of N.caninum， two putative protein （XM_003882171.1） and （XM_003882600.1）， and an unnamed protein（XM_003885351.1） respectively. Four immune associated proteins were successfully obtained， which lay the foundation for the diagnosis and vaccine of Neospora caninum.

Key words： Neospora caninum；cDNA expression library；immune associated protein；screening

犬新孢子蟲（Neospora caninum）是一种新发现的胞内寄生性原虫，最早由Bjerkas于1984年在患脑膜炎和肌炎的幼犬体中发现，并由Dubey于1988年根据其形态特征命名为犬新孢子虫。目前，新孢子虫呈世界性分布，在中国刘群等于2007年在流产胎牛脑组织中发现了新孢子虫，证实了我国也存在新孢子虫的感染[1]。新孢子虫可感染犬、牛等多种动物，寄生于宿主体内可导致孕畜流产或产死胎以及新生幼畜运动神经障碍和神经系统疾病，给养殖业带来巨大损失。

新孢子虫对宿主细胞的粘附/侵入是其发病机制中一个重要的过程。首先，微线蛋白介导新孢子虫胞外膜紧密附着在其宿主细胞细胞膜上[2]，与细胞膜上受体结合并形成可移动的连接区域[3]。经棒状体蛋白对宿主细胞进行修饰后[4-5]，宿主细胞膜内陷并形成纳虫泡，并在细胞骨架驱动下向速殖子末端靠拢，直至其完全进入空泡中。之后致密颗粒蛋白修饰纳虫空泡，该修饰过程在空泡内骨架结构的形成中起重要作用，并且不易被溶酶体所裂解。……