赵李婧　曹新文　李永梅

摘要：分析橡胶草HMGR基因的表达情况，构建原核表达载体，转化BL21菌株并诱导表达。构建细胞融合表达载体，转化GV3101菌株并侵染洋葱表皮细胞，在共聚焦显微镜下观察基因表达情况。构建植物过表达载体并侵染烟草，利用紫外分光光度法检测三萜含量的变化。通过IPTG诱导和SDS-PAGE检测，获得分子量为62659 1 ku的蛋白，与预期蛋白相符合，且37 ℃诱导6 h时表达最明显；通过激光共聚焦显微镜观察，该基因主要在细胞膜上表达；紫外可见分光光度法表明转基因烟草中三萜的含量高于空白烟草。橡胶草HMGR基因分别在大肠杆菌、洋葱鳞片内表皮和烟草中成功表达。

关键词：橡胶草；HMGR基因；原核表达；亚细胞定位；总三萜提取物

中图分类号： Q786文献标志码：

文章编号：1002-1302（2017）16-0042-04

收稿日期：2016-03-31

基金项目：国家自然科学基金（编号：31360060）。

作者简介：赵李婧（1989—），女，山西晋城人，硕士研究生，主要从事植物基因工程的研究。E-mail：851409674@qqcom。

通信作者：闫洁，博士，副教授，主要从事生物化学和分子生物学教学和科研工作。E-mail：1653842328@qqcom。

天然橡胶的生物合成是通过产胶植物体内的异戊二烯代谢途径完成的，而3-羟基-3-甲基戊二酰辅酶A（HMGR）基因及其启动子是该代谢途径中的关键限速酶基因，它控制着碳流的流向和代谢反应速率，也是萜类化合物代谢调控的重要位点。目前，已经从橡胶树、水稻、甘草、皂苷、阳春砂、三七、雷公藤、拟南芥、番茄、杜仲等植物中克隆得到了该酶的基因及其启动子，它们以基因家族的形式存在并控制着代谢途径中产物的合成[2-11]。……