1.贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550001；2.贵州医科大学神奇民族医药学院，贵州 贵阳 550005

杞明眼保胶囊的提取工艺研究

苏松柏1吕海涛1张丽丽2黄健1汤瑾1朱迪1

1.贵阳中医学院第一附属医院，贵州 贵阳 550001；2.贵州医科大学神奇民族医药学院，贵州 贵阳 550005

目的优选杞明眼保胶囊的提取工艺。方法以出膏率和大黄酚的含量为指标，用高效液相色谱仪测定含量，采用正交实验法优选杞明眼保胶囊的最佳提取工艺。结果煎煮次数、煎煮时间对出膏率影响很大，其次为加水量，最佳提取工艺为加10倍量体积的水，提取3次，每次90min。结论通过验证，优选出最佳提取工艺稳定可行。

杞明眼保胶囊；提取工艺；正交实验；高效液相色谱法

杞明眼保胶囊(眼保Ⅱ号胶囊)是经贵阳中医学院第一附属医院老中医李宗智多年的临床研究，根据中医药学理论研制而成的纯中药复方制剂，由决明子、丹参、山药、茯苓等15味中药组成[1-2]。具有清肝养肝、滋肾明目之功效，能促进视网膜细胞修复，增强玻璃体的稳固性，预防视网膜剥离。主要用于近视、视疲劳、眼底血管病变、眼底视网膜病变的治疗，经过多年的临床观察其疗效显著。本课题在对杞明眼保胶囊进行深度开发研究的基础上，以中医药理论为指导，主要对原提取工艺进行改进优化[3]。

1 仪器与试药

1.1 仪器 Agilent 1100型高效液相色谱(HPLC)仪，包括四元泵，自动进样器，VWD检测器，柱温箱，(美国Agilent公司)；AB265-S型电子分析天平(瑞士Metler Toledo公司)；KQ-200KDB型超声波清洗仪(昆山市超声仪器有限公司)。

1.2试药 大黄酚对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110769-200514)；甲醇为色谱纯试剂，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯，药材饮片均从贵州省济仁堂药材有限公司购买。

2 方法

2.1 提取工艺设计 以决明子中有效成分大黄酚的提取量和干膏得率作为双考察指标，采用高效液相色谱法测定大黄酚的含量，采用抗干燥失重的方法测定干膏得率。选择容积比、提取次数、提取时间3个因素，每个因素设3个水平。试验设计方案见表1。

表1 因素水平设计方案

2.2 大黄酚的测定方法 先称取丹参100g，用8倍量80%的乙醇水浴锅上回流提取2次，每次2h[1]，所得的丹参药渣平均分成10份。按处方比例称取其他药材140g共9份，将9份醇提后的丹参药渣加入复方中，按正交试验方案提取，将煎煮好的药液均用40目筛过滤，合并每1个实验的滤液，浓缩，浓缩器从大容量转移到小容量，移至恒重的蒸发皿中浓缩至稠膏状，然后转移至烘箱中，在100℃下烘干。接着在105℃下烘30min，后转移至恒温干燥箱中干燥30min，得干膏(计算出干膏的重量，计算干膏率)见表2。按供试品溶液的制备方法制备，采用高效液相色谱法测定并计算大黄酚的含量。

表2 杞明眼保胶囊提取工艺正交试验结果

2.2.1 色谱条件 色谱柱：Agilent C18(150mm×4.6mm，5μm)；流动相：无水甲醇-0.1%磷酸溶液(87:13)，用前以0.45μm微孔滤膜滤过；流速：1.0mL·min-1；检测波长：254nm；进样量：10μL；以外标法测定。柱温：25℃。理论塔板数按大黄酚计算应不低于3000。

2.2.2 对照品溶液的制备 精密称取大黄酚对照品约5.63mg，置50mL量瓶中，加甲醇超声溶解，用甲醇定容至刻度，摇匀，制成112.6μg/mL大黄酚溶液，再精密吸取1mL置10mL量瓶中，制成11.26μg/mL大黄酚溶液，用0.45μm微孔滤膜滤过，按上述测定条件进行测定。如图1所示。

2.2.3 供试品溶液的制备 分别取所得提取浓缩干燥好的干浸膏约2.5g，精密称定，置200mL具塞锥瓶中，加甲醇50mL，精密吸取，称定重量，置水浴上加热回流30min，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，过滤。精密吸取续滤液25mL，置于150mL烧杯中，水浴上蒸干，残渣加10%的盐酸溶液30mL，置水浴上加热水解1h，放冷，用三氯甲烷振摇萃取4次，每次用30mL，合并4次三氯甲烷溶液，水浴上回收溶剂至干，残渣用甲醇溶解，置10mL量瓶中，稀释至刻度，摇匀，即得。用0.45μm微孔滤膜滤过，按上述色谱分析条件测定。如图1所示。

2.2.4 阴性对照溶液的制备 取未加决明子药材的处方，加10倍量水提取2次，每次60min提取，滤过，干燥。所得的阴性对照品干浸膏按供试品溶液的制备方法操作，即得。用0.45μm微孔滤膜滤过，按上述色谱分析条件测定。如图1所示。

2.2.5 线性关系考察 精密吸取浓度为11.26μg/mL的大黄酚对照品溶液1μL、2μL、4μL、6μL、8μL、10μL注入液相色谱仪，在上述色谱条件下测定，以大黄酚进样量(μg)为横坐标，峰面积值为纵坐标，绘制标准曲线。如图2所示，进行回归处理，线性方程Y=5362.3x-0.2167，R=1.0000。结果表明大黄酚在0.01126～0.1126μg范围内与峰面积的线性关系良好。

2.2.6 干膏得率计算 干膏得率为所得干膏的重量与原药材重量比的百分数。见表2。

3 实验结果

综合评分以大黄酚含量的最大值和干膏的最大值为参照，将数据进行归一化，再给出不同的权重，大黄酚的含量权重系数为0.6，干膏率权重系数为0.4。以综合数值进行统计分析，其中综合评分Y=0.6×X1×100/4.46+0.4×X2×100/21.86。其直观分析的结果见表2，方差分析的结果见表3。通过直观分析，比较F0值，在所选因素水平范围内，影响因素大小顺序为A>C>B，即提取次数和时间对综合评分影响最大，容积比影响最小。结合极差初步确定提取条件为A3B2C3，即8倍量的水煎煮3次，每次煎煮2h。结果见表2和表3。

表3 方差分析表

4 验证实验

根据正交实验结果筛选的工艺条件A3B2C3，进行3批验证实验，按处方量称取药材，加10倍量水，煎煮3次，每次90min，结果表明大黄酚的平均提取量为4.68mg，平均干膏率为24.27%，且重现性好，故认为该工艺稳定可靠。结果见表4。

表4 杞明眼保胶囊最佳提取工艺验证表

5 讨论

中药复方制剂中药物浸出率的高度低、提取工艺是复方制剂质量控制基础的重要影响因素。影响提取率的因素有很多，如提取时间、提取次数、加水量，提取的温度、溶剂极性、溶剂浓度、浸泡时间、药材粒度等，应找出影响提取的主要因素，优选出最佳的提取工艺，以提高复方的浸出率[4]。由本文结果可看出，提取次数和提取时间对所提药物的含量和干膏得率有明显影响，其中提取的次数是影响本制剂的主要因素。

杞明眼保胶囊的提取工艺是采用丹参乙醇提取后，将滤过的药渣与复方其他药材合并水提取，以君药决明子中的大黄酚的含量和干膏率为指标，优选最佳的水提取工艺，笔者主要解决杞明眼保胶囊提取工艺的稳定和可行性，尽可能地提取有效成分，以满足临床疗效，从而为贵阳中医一附院临床应用提供安全、有效、可控的制剂，并为未来开发新药研究奠定基础，造福于广大近视和弱视患者。

杞明眼保胶囊处方有决明子、丹参、茯苓、山药、旱莲草、女贞子、淡竹叶、黑芝麻、茺蔚子、南沙参、麦冬、覆盆子、连翘、石斛、刺蒺藜15味中药材组成，在缺决明子药材的阴性图谱中，在大黄酚峰位置没有峰出现，说明采用大黄酚为指标成分专属性好。

[1]张培琴.HPLC法测定眼保Ⅱ号胶囊中大黄酚的含量[J].中国药房,2010,19(5)：1792-1793.

[2]张建玲,李宗智.眼保Ⅱ号胶囊治疗青少年近视和假性近视临床观察[J].中成药,2006,5(5):778-779.

[3]杨广德,张继业,张莉,等.丹参中丹参酮IIA和隐丹参酮的提取方法研究[J].药物分析杂志,2006,26(12):1807-1810.

[4]苏松柏,张永萍,何焜,等. 三妙消痛贴的提取工艺研究[J].中国实验方剂学杂志,2010,16(14):9-11.

StudyonExtractingTechnologyofQimingyanbaoCapsules

SU Songbai1LV Haitao1ZHANG Lili2HUANG Jian1TANG Jin1ZHU Di1

1.The First Affiliated Hospital of Guiyang College of Traditional Chinese Medicine，Guiyang 550001,China; 2.College of Medicine, Guizhou Medical University,Guiyang 550005，China

ObjectiveTo optimize the preparation process of Qimingyanbao Capsules.MethodsThe content of chrysophanol and chrysophanol were used as indexes, samples were analyzed by HPLC.The optimum extraction process of Qimingyanbao Capsules was determined by orthogonal experiment.ResultsThe paste rate effect of was observed in decoction times and decoction time , the second was water addition,The results was regarded as the optimal extraction process, that is 10 times of water,3 times of extraction and each for 90 minutes.ConclusionExperiment has been done to prove that the optimum extraction process is stable and feasible.

Qimingyanbao Capsule；Extraction Process；Orthogonal Experiment；HPLC

R284

A

1007-8517(2017)18-0029-04

2017-07-14 编辑：陶希睿)

贵阳中医学院院内课题([2011]43号),贵州省中医药管理局课题(QZYY2012-14)。

苏松柏(1984-)，男，硕士研究生，主管中药师，研究方向为新制剂及新剂型开发研究。E-mail:258183604@qq.com