熊俊逸， 胡 姣， 夏 骊， 庞代文， 张志凌

(生物医学分析化学教育部重点实验室，武汉大学化学与分子科学学院，湖北武汉 430072)

1976年，埃博拉病毒首次在苏丹出现，患者出现出血热症状，引发腹泻、呕吐、胸痛、喉咙疼、皮疹[1]，致死率高达90%[2 - 3]。2014～2016年，埃博拉病毒在西非蔓延，据国际卫生组织报道，28 646人受到感染，11 323人不治身亡[4]。埃博拉病毒含有7种结构蛋白，分别是跨膜糖蛋白(GP)、核蛋白(NP)、RNA聚合酶(L)和4种病毒结构蛋白(VP)。其中，糖蛋白位于病毒和感染的细胞表面，参与病毒通过受体介导和膜融合进入宿主细胞的过程[5]。目前，埃博拉病毒的检测方法主要有酶联免疫吸附法(ELISA)[6]、荧光免疫法(FIA)[7]、反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)[8]、电化学传感法[9]等。ELISA法具有操作简单、仪器简便的特点，通过检测核蛋白、糖蛋白、IgG、IgM来诊断埃博拉疾病[10]。而比色法，甚至目视比色法，可提供简便、快捷的检测手段[11 - 12]，有利于埃博拉病毒的现场检测。

免疫磁球具有便于操控、高比表面积等特点，可从复杂的基质中分离和富集低浓度的目标物，从而实现复杂样品中稀有组分的高灵敏检测[13]。因此，本文采用免疫磁球捕获和富集埃博拉病毒糖蛋白，通过比色信号对埃博拉病毒进行检测。

1 实验部分

1.1 仪器与试剂

TE2000-U 型荧光倒置显微镜(日本，Nikon 公司)；UV-2550 型紫外-可见分光光度计(日本，Shimadzu 公司)；RF-5301PC 型荧光分光光度计(日本，Shimadzu 公司)；Synergy 超纯水系统(美国，Millipore 公司)。

Tween 20、1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)、N-羟基琥珀酰亚胺(NHS)均购于Sigma Aldrich。MES(C6H13NO4S·H2O)购于Aladdin试剂公司。生物素化试剂Sulfo-NHS-LC-Biotin、1-step Ultra TMB、Dynabeads M-270羧基功能化磁球(2.8 μm，30 mg/mL)，均购于Thermo Fisher。……