何彦春，魏玉明，哈 利，韩庆彦，李旭蓉，李 珊，王东辉，赵福堂，胡永彪，韦志翔，李 辉，李学虎，康 磊

（1. 张掖市动物疫病预防控制中心，甘肃张掖 734000；2. 甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃兰州 730046；3. 甘州区动物疫病预防控制中心，甘肃省张掖 734000）

布鲁氏菌病活疫苗（M5-90株）免疫绵羊试验

何彦春1，魏玉明1，哈 利2，韩庆彦2，李旭蓉1，李 珊1，王东辉3，赵福堂3，胡永彪3，韦志翔3，李 辉3，李学虎3，康 磊3

（1. 张掖市动物疫病预防控制中心，甘肃张掖 734000；2. 甘肃省动物疫病预防控制中心，甘肃兰州 730046；3. 甘州区动物疫病预防控制中心，甘肃省张掖 734000）

为掌握布鲁氏菌病活疫苗（M5-90株）免疫后的绵羊抗体水平、消长情况和不良反应发生情况，选择育肥羊和怀孕母羊各100只，分别用皮下注射免疫和点眼免疫法，开展了3个月的跟踪观察和定期检测。结果表明：布鲁氏菌病活疫苗（M5-90株）对育肥羊注射免疫后15 d 的平板凝集抗体转阳率达100.0%，90 d降至22.7%；点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达85.4%，90 d日降至0；个别3月龄以下育肥羊对注射免疫和点眼免疫均会发生一定程度不良反应，甚至死亡。活疫苗（M5-90株）对怀孕母羊皮下注射免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达100%，90 d降至14%；点眼免疫后15 d的平板凝集抗体转阳率达95.9%，90 d降至6.4%；注射免疫和点眼免疫均能造成一定比例的母羊流产和其他不良反应。因此，布鲁氏菌病活疫苗（M5-90株）不宜用于3月龄以下羔羊和怀孕母羊的免疫。

布鲁氏菌病活疫苗（M5-90株）；免疫；绵羊；试验

Abstract：In order to investigate the antibody level and changes in sheep immunized with live Brucellosis vaccine（M5-90 strain），and inspect the adverse reactions after immunization，100 fattening sheep and another 100 pregnant ewes were selected and immunized by subcutaneous injection and eye dropping，and a 3-month tracing observation and regular detection were carried out on the sheep. As for fattening sheep，it's indicated that the positive rate of anti-Brucella antibody detected by plate agglutination test could reach to 100.0% at the 15th day post inculation（dpi）and reduce to 22.7% at 90 dpi by subcutaneous injection，the whilst positive positive rate of anti-Brucella antibody could reach to 85.4% at 15 dpi and drop to 0.0% at 90 dpi by eye dropping vaccination strategies. Some fattening sheep less than 3-mouth old appeared adverse reactions after both subcutaneous injection and eye dropping of Brucellosis vaccine（M5-90 strain）. As for pregnant sheep，the positive rate of anti-Brucella antibody could reach to 100.0% at 15 day dpi and reduce to 14.0% at 90 dpi. The positive rate of anti-Brucella antibody by eye dropping could reach to 95.9% at 15 day dpi and reduce to 6.4% at 90 dpi. A definite proportion of pregnant ewes aborted or showed adverse reaction. In conclusion，live Brucellosis vaccine（M5-90 strain）should not be applied to sheep less than 3-month old and ewe in any pregnant stage.

Key words：live Brucellosis vaccine（M5-90 strain）；immunization；sheep；test

近年来，布鲁氏菌病（以下简称布病）疫情 在全国多地出现反弹，成为危害公共卫生安全较为严重的人兽共患病。被划为布病流行一类区的甘肃省在持续进行了几年的布病检测、净化后，由于畜群检测面和检测量不断增大，检测任务量和资金供需矛盾加剧，净化工作难以为继。为尽快遏制羊布病持续反弹的势头，保障人民群众身体健康和养羊业持续发展，根据《国家布鲁氏菌病防治计划（2016—2020年）》要求，甘肃省防制重大动物疫病指挥部及时制定下发了《关于推进羊布病区域强制免疫工作的通知》，要求在免疫试点的基础上，在全省布病流行一类区和区域内联片的二类区实施布病强制免疫。目前，对羊免疫常用的布病疫苗有S2、M5等，其均为弱毒活疫苗，各有优缺点。S2疫苗安全性较好，不会造成怀孕母羊流产，但免疫原性较弱；M5疫苗免疫原性好，适用于皮下、肌注和口服等多种免疫途径，但容易导致怀孕母羊流产。M5-90株疫苗是将M5株在鸡成纤维细胞传代90次后研发的减毒活疫苗。为验证布病活疫苗（M5-90株）对绵羊的免疫效果，开展了本试验。

1 材料与方法

1.1 疫苗和免疫方法

布病活疫苗（M5-90株），每头份含活菌数至少为10×109CFU，由某公司生产供应，批号20160724，有效期1年。按照疫苗使用说明书，将疫苗用稀释液稀释后，皮下注射组在颈部皮下注射1头份；点眼组在一侧眼结膜内滴入1头份。

1.2 试验绵羊分组及免疫方法

1.2.1育肥绵羊分组及免疫。选择不同日龄育肥绵羊100只，随机分为两组，每组50只。其中，一组颈部皮下注射免疫，另一组点眼免疫。各组羊群均用耳标编号。

1.2.2怀孕绵羊分组及免疫。选择不同怀孕日龄绵羊100只，随机分为两组，每组50只。其中，一组颈部皮下注射免疫，另一组点眼免疫。各组羊群均用耳标编号。

1.3 试验羊群饲养管理及观察

试验羊白天放牧，晚上赶回圈舍并适当补饲。免疫后，观察各试验组羊群反应，及时记录死亡、流产和其他不良反应情况，对发生不良反应的羊只及时救治。

1.4 样品采集方法

对各试验组羊群分别在免疫后1 d、15 d、30 d、60 d、90 d全群采血，将血清号与耳标号对应，无菌分离血清备检。

1.5 检测试剂和方法

1.5.1检测试剂。布鲁氏菌虎红平板凝集试验抗原、阳性血清、阴性血清，由青岛易邦生物工程有限公司生产，批号20160017。

1.5.2检测方法。采用虎红平板凝集试验（RBPT），按照《动物布鲁氏菌病诊断技术》（GB/T 18646—2002）的要求进行。在玻片上加0.03 mL被检血清，然后加入虎红平板抗原0.03 mL，摇匀或用牙签混匀，在4 min内判定结果。

2 试验结果

2.1 各试验组死亡、流产和其他不良反应发生情况

育肥羊共计死亡18只，平均死亡率为18%。怀孕母羊死亡3只，平均死亡率为6%；流产14只，平均流产率为14%（表1）。羊死前主要表现发烧、呼吸困难、食欲废绝、不反刍、拉稀等症状。

表1 各试验组死亡和流产情况统计

2.2 虎红平板抗体检测结果

育肥羊注射组在免疫后15 d 100%出现抗体阳性，60 d出现下降；育肥羊点眼组在免疫后30 d抗体阳性率达到最高，90 d降至0。怀孕母羊注射组在免疫后15 d 100%出现抗体阳性并保持15 d，60 d下降到68%；怀孕母羊点眼组在免疫后15 d抗体阳性率达到95.9%，90 d下降到6.4%，试验期内发生流产4只，均发生在免疫30 d以后（表2）。

3 讨论与小结

用布病活疫苗（M5-90株）皮下注射育肥羊，15 d 后的平板凝集抗体转阳率达100%，而点眼免疫育肥羊的抗体上升较慢，在免疫后30 d才达到93.60%，但注射免疫组的死亡率较高。

表2 各试验组布病平板凝集抗体检测结果统计（单位：只或%）

用活疫苗（M5-90株）皮下注射和点眼免疫的怀孕母羊，均在免疫后15 d达到抗体高峰，但注射免疫组在90 d试验期内共发生流产10只，流产率达20%，高于点眼免疫组。这与王东辉[1]报道的用布病M5疫苗注射怀孕绒山羊的流产率（22.39%）接近，但远超过潘永红等[2]报道的用布病M5疫苗注射怀孕羊的流产率（4.18%）。

试验结果表明：用布病活疫苗（M5-90株）对育肥羊进行注射和点眼免疫均可达到预期免疫效果，其中注射免疫的抗体转阳率稍高于点眼免疫。育肥羊对注射免疫和点眼免疫均会发生一定程度的不良反应，甚至死亡，不建议对3月龄以下的羔羊用布病活疫苗（M5-90株）免疫。用活疫苗（M5-90株）对怀孕母羊皮下注射免疫和点眼免疫均能产生良好免疫效果，但均能造成一定比例的母羊流产和其他不良反应，其中注射免疫造成的母羊流产情况明显高于点眼免疫，不建议用布病活疫苗（M5-90株）对怀孕的母羊进行免疫。

[1] 王东辉. 甘州区羊布病免疫试点工作现状分析[J]. 甘肃畜牧兽医，2016，32（17）：32-34.

[2] 潘永红，李勇生，王子坚，等. 羊同时注射布病M5菌苗与口蹄疫疫苗副反应观察[J]. 中兽医医药杂志，2017，36（1）：64-65.

（责任编辑：朱迪国）

Immunity Test of Live Brucellosis Vaccine（M5-90 strain）in Sheep

He Yanchun1，Wei Yuming1，Ha Li2，Han Qingyan2，Li Xurong1，Li Shan1，Wang Donghui3，Zhao Futang3，Hu Yongbiao3，Wei Zhixiang3，Li Hui3，Li Xuehu3，Kang Lei3
（1. Zhangye Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangye，Gansu 734000；2. Animal Disease Prevention and Control Center of Gansu Province，Lanzhou，Gansu 730046；3. Ganzhou Animal Disease Prevention and Control Center，Zhangye，Gansu 734000）

S852.65

A

1005-944X（2017）10-0072-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.10.020

哈 利