刘 朋，陈 萌，程子龙，王方昆，刘思当

（山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271000）

山东省部分地区奶牛场布鲁氏菌病血清学调查

刘 朋，陈 萌，程子龙，王方昆，刘思当

（山东农业大学动物科技学院，山东泰安 271000）

2016年5—12月，从山东省泰安市、枣庄市、菏泽市和青岛市等地区6个奶牛场的成母牛群中，随机采集血清1 736份，分别用虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）和间接酶联免疫吸附试验（ELISA）平行检测布鲁氏菌病血清抗体。结果显示：该6个奶牛群的布鲁氏菌病抗体总阳性率为11.12%；3种方法的阳性检出率各不相同，其中RBPT的阳性检出率为12.73%，SAT为11.12%，ELISA为11.75%；5个免疫牛场的布鲁氏菌病血清抗体检测均呈阳性，并且不同地区奶牛场之间的抗体阳性率差异较大，最高的为40.00%，最低的为8.93%；1个非免疫牛场的布鲁氏菌病血清抗体检测结果为阴性。检测结果提示：鉴于当前严重的布鲁氏菌病疫情形势，山东省的布鲁氏菌病防控压力加大；任何一种检测方法都有局限性，3种方法联合应用可有效降低出现假阳性和假阴性的概率；上述检测方法均无法区分免疫和感染，因此免疫给布鲁氏菌病的检测净化带来了极大困难。

布鲁氏菌病；虎红平板凝集试验；试管凝集试验；间接酶联免疫吸附试验；血清学调查

Abstract：1 736 serum samples were collected from six dairy farms in Tai´an City，Zaozhuang City，Heze City and Qingdao City from May to December，2016. The Brucellosis antibodies were detected by RBPT，SAT and ELISA. The results showed that the total positive rate of 6 dairy herds in Shandong Province was 11.12%，and the positive detection rates of the three methods were not identical. The positive rates of RBPT，SAT and ELISA were 12.73%，11.12% and 11.75%，respectively. The detection of Brucella serum antibody in 5 immunized cattle farms were positive，and the antibody positive rates in different dairy farms were significantly different. The highest prevalence of one farm was 40.00%，while the lowest was 8.93%. Results of brucellosis detection from a non-immunized cattle farm was negative. The results showed that in view of the current serious epidemic situation，prevention and control of Brucellosis in Shandong Province was austere.There were some limitations in any detection method，and the joint application of the 3 methods could effectively reduce the probability of false positive and false negative. The detection methods were unable to distinguish between immunity and infection，therefore the immunity of Brucellosis has brought great difficult to purification.

Key words：Brucellosis；RBPT；SAT；ELISA；epidemiological investigations

布鲁氏菌病（以下简称布病）是由布鲁氏菌引起的一种人兽共患传染病。在2003年公布的《一、二、三类动物疫病病种名录》中，我国将其列为二类动物疫病[1]。牛、羊、猪、鹿等多种动物对其易感。人感染后严重影响生殖健康和生活质量，甚至丧失劳动能力[2]，因此该病的防控具有重要的公共卫生意义。近年来，畜间及人间布病有回升趋势。为了解当前山东省奶牛场的布病流行情况，从4个地区的6个规模化奶牛场，采集1 736份成母牛血清，采用虎红平板凝集试验（RBPT）、试管凝集试验（SAT）、间接酶联免疫吸附试验（ELISA）进行检测，为布病防控提供基础数据。

1 检测材料

1.1 血清来源及背景

待检血清从山东省4个地区6个规模化奶牛场的成母牛群中采集，其中5个牛场的成母牛均免疫过布鲁氏菌A19疫苗（表1）。

表1 6个规模化奶牛场的成母牛群血清样品信息

1.2 检测试剂

布病虎红平板凝集试验抗原、试管凝集试验抗原、试管凝集试验阴阳性血清均购自中国疾病预防控制中心；酶联免疫吸附试验，使用IDEXX牛布鲁氏菌抗体检测试剂盒。

2 检测方法

布病抗体检测（虎红平板凝集试验、试管凝集试验），按照国家标准（GB/T18646—2002）操作[3]；酶联免疫吸附实验，按照ELISA试剂盒说明书操作。

3 检测结果

对1 736份血清进行布病抗体检测。结果显示：奶牛群的布病抗体总阳性率为11.12%；各奶牛场的检出阳性率差异较大，其中青岛奶牛场检出的阳性率最高。3种检测方法中，RBPT检出的阳性最多，阳性检出率为12.73%；ELISA次之，阳性检出率为11.75%；SAT最少，阳性检出率为11.12%（表2、表3）。

表2 6个规模化奶牛场的布病抗体检测结果

表3 3种布病抗体检测方法的结果汇总

4 分析与讨论

本次调查结果显示，山东省6个奶牛场的布病抗体总阳性率为11.12%。这与2014年岳瑞超等[1]从山东省济南市、青岛市两处奶牛场的抽样检测结果（10.05%）相比偏高。原因可能是山东省属于我国布病管理的一类地区，对奶畜原则上不免疫，而调查的这6家奶牛场中有5家进行过免疫，导致抗体阳性率偏高。

近年来，我国奶牛交易量逐渐增加，布病阳性率呈上升趋势。2009—2011年周继章等[4]调查全国部分省（区）动物布病流行情况，发现奶牛布病阳性率为7.5%；2011—2013年王基隆等[5]调查布病的总阳性率为18.58%；2014年韦明等[6]调查布病的总阳性率为22.51%。以上数据说明，全国部分省（区）的布病发病率在逐年上升，流行情况比较严重。若在奶牛交易过程中未进行严格检疫，再加上消毒不严，感染牛很容易将细菌带入牛场，由此加大了布病感染与传播的风险。虽然未实施免疫奶牛场的布病抗体为阴性，但鉴于国内布病的疫情形势以及奶牛流通的加快，山东省的布病防控压力在逐步加大。

本次检测结果显示，山东省不同地区奶牛场之间的布病抗体阳性率差异较大。这可能与疫苗免疫时间的长短有关。理论上讲，A19疫苗免疫6个月后，大部分奶牛血清中的布病抗体效价应由阳性变为阴性，个别奶牛由于个体差异可能不产生抗体或者抗体阳性持续数间长，甚至长达2年。青岛奶牛场仅免疫2个月，因此抗体阳性率高；泰安1场和3场分别已免疫6个月或7个月，抗体水平下降，但阳性率仍受疫苗产生的抗体干扰；虽然菏泽奶牛场和枣庄奶牛场已分别免疫1年和2年，理论上疫苗产生的抗体效价应该转阴，但由于个体差异，个别奶牛抗体效价仍是阳性。

目前，我国官方规定的布病检测方法为，先通过RBPT筛查，再以SAT对阳性样品进行确认。RBPT操作简单、价格低廉、敏感性高，但特异性低，适合用于样品初筛。虽然目前的血清学检测方法较多，但没有任何一种血清学方法适合于所有个体或群体的流行病学调查。特别是在对个体进行筛查时，所有的方法都有局限性。血清学检测方法的敏感性和特异性会因检测样本量的不同而有所不同[7]，因此3种方法联合应用，能有效降低出现假阳性和假阴性的概率。上述检测方法均无法区分免疫和感染，因此免疫给布病的检测净化带来了极大困难。

[1] 岳瑞超，程子龙，李宁，等. 山东牛场常见传染病血清流行病学调查[J]. 中国动物检疫，2014，31（6）：58-61.

[2] 范伟兴，狄栋栋，黄保续. 发达国家根除家畜布病的主要措施[J]. 中国动物检疫，2013，30（4）：68-70.

[3] 姚火春. 兽医微生物学实验指导[M]. 北京：中国农业出版社，2003：46-49.

[4] 周继章，宫晓炜，曹小安，等. 2009-2010 年我国部分省（区）动物布鲁氏菌病流行情况调查[C]// 中国科学技术协会. 中国科学技术协会第3届全国人畜共患病学术研讨会论文集. 北京：中国科学技术协会，2011：3.

[5] 王基隆，张亮，韩猛，等. 规模化奶牛养殖场布鲁氏菌病血清学调查[J]. 中国农学通报，2014（17）：35-38.

[6] 韦明. 规模化牧场布鲁氏菌病血清学调查与iELISA检测方法的建立[D]. 西宁：宁夏大学，2016.

[7] GODFROID J，SAEGERMAN C，WELLEMANS V，et al.How to substantiate eradication of bovine rucellosis when aspecific serological reactions occur in the course of brucellosis testing[J]. Vet. Microbiol，2002，90：461-477.

（责任编辑：朱迪国）

Serological Investigation on Brucellosis in Some Dairy Farms of Shandong Province

Liu Peng，Chen Meng，Cheng Zilong，Wang Fangkun，Liu Sidang
（College of Animal Science and Technology，Shandong Agriculture University，Tai´an，Shandong 271000）

S854.43

A

1005-944X（2017）10-0001-03

10.3969/j.issn.1005-944X.2017.10.001

山东省现代农业产业技术体系资助（SDAIT-09-04）

刘思当