杨睿+董卓+王梦琪

[摘要] 目的 探讨表没食子儿茶素没食子酸酯（EGCG）对氧化应激诱导的大鼠H9C2凋亡的细胞保护作用及机制。方法 H9C2细胞传代培养后进行随机分组。阴性对照组（正常培养液培养），H2O2损伤组（100 μmol/L H2O2作用12 h），EGCG低浓度组（10 μmol/L EGCG孵育24 h后，加入H2O2作用12 h），EGCG高浓度組（100 μmol/L EGCG孵育24 h后，加入H2O2作用12 h）。MTT比色法检测细胞活力，Hochest33258染色观察凋亡细胞形态，流式细胞仪检测细胞凋亡率，比色法检测凋亡相关因子Caspses-3及Caspase-9的表达。 结果 10 μmol/L及100 μmol/L的EGCG作用于H9C2细胞后，细胞存活率分别提高到66.68%和78.63%，与H2O2损伤组（57.33%）比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；Hoechst33258染色及流式细胞技术结果显示，不同浓度的EGCG作用于H9C2细胞后，细胞凋亡率逐渐下降，与氧化损伤组比较，差异有统计学意义（P < 0.05）；此外，EGCG能够有效抑制H9C2细胞内Caspase-3、Caspase-9的表达。 结论 EGCG通过抑制Caspses-3及Caspase-9的表达有效抑制了H9C2细胞的氧化损伤，从而为其用于治疗心肌细胞损伤提供可靠的实验依据。

[关键词] 表没食子儿茶素没食子酸酯；H9C2细胞；Caspses-3；Caspase-9；凋亡

[中图分类号] R54 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210（2017）08（c）-0034-04

[Abstract] Objective To discuss the protective effects and possible mechanisms of epigallocatechin gallate （EGCG） in oxidative damage of rat H9C2 cells induced by oxidative stress. Methods H9C2 cells were random grouped after subcultured. There were negative control group （cultured with normal nutrient solution）， H2O2 injury group （incubated with 100 μmol/L H2O2 for 12 h）， EGCG low dose group （incubated with 10 μmol/L EGCG for 24 h then cultured with 100 μmol/L H2O2 for 12 h） and EGCG high dose group （incubated with 100 μmol/L EGCG for 24 h then cultured with 100 μmol/L H2O2 for 12 h）. Cell viability were tested by MTT colorimetric detection， apoptotic cell morphology was observed by Hochest33258 staining， apoptosis rate was detected by flow cytometry， expression of apoptosis-related factors Caspses-3 and Caspase-9 were tested by colorimetric detection. Results The cell survival rate increased to 66.68% and 78.63% after treated with 10 μmol/L and 100 μmol/L EGCG compared with H2O2 injury group （57.33%）， with statistically significant difference （P < 0.05）. Hoechst33258 dying and flow cytometry technology results showed that cell apoptosis rate dropped gradually after treated with different concentration of EGCG with H2O2 injury group， with statistically significant difference （P < 0.05）. Besides， the expression of Caspase-3 and Caspase-9 were inhibited after treated with EGCG. Conclusion EGCG effective inhibit H9C2 cells oxidative damage by inhibiting the expression of Caspses-3 and Caspase-9， which provide reliable experimental basis for the treatment of injuries in myocardial cells.

[Key words] Epigallocatechin gallate； H9C2 cells； Caspses-3； Caspase-9； Apoptosis

人体的许多疾病都与细胞的氧化损伤和凋亡密切相关，其中，氧化应激损伤诱导的心肌细胞凋亡与心肌缺血、冠状动脉粥样硬化性心脏病等多种疾病的发生有关[1-4]。表没食子儿茶素没食子酸酯（epigallocatechin gallate，EGCG）是从天然植物绿茶中提取的一种儿茶素单体。EGCG具有很强的抗氧化能力，长期饮用绿茶可以明显改善心肌细胞功能，降低心肌的缺血再灌注损伤[5-6]。本研究通过在培养基中加入外源性活性氧H2O2诱导鼠H9C2心肌细胞凋亡，探索EGCG对氧化应激引起细胞凋亡保护作用及机制。endprint

1 材料与方法

1.1 实验材料

大鼠H9C2心肌细胞株（中国科学院上海细胞库），EGCG（分子量：458.37832，纯度≥99%，购自美国Sigma公司，批号50299），DMEM培养基（Sigma公司，批号D0819），30% H2O2（天津基准化学试剂有限公司，批号20131016），CCK-8試剂盒（广州研创生物技术发展有限公司，批号C0038），Hoechst33258试剂盒（南京碧波生物科技有限公司，批号BA50），Annexin V FITC/PI（美国BD公司，批号556570），Caspase-3、Caspase-9试剂盒（南京建成生物工程研究所，批号G015、G018）。……