毛山山，程小珍，崔荣花，元建华，王美清

（中南大学湘雅医学院附属海口医院 肿瘤化疗科，海南 海口 570208）

I EX-1蛋白在胃癌中的表达及其意义*

毛山山，程小珍，崔荣花，元建华，王美清

（中南大学湘雅医学院附属海口医院 肿瘤化疗科，海南 海口 570208）

目的揭示即刻早期反应X-1（IEX-1）蛋白在胃癌组织及细胞系中的表达，探讨其对人胃癌细胞凋亡和增殖的影响。方法采用免疫组织化学法检测100例胃镜活检标本中IEX-1蛋白的表达，用实时荧光定量聚合酶链反应和Western blot检测人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN28中IEX-1基因和蛋白的表达，同时转染IEX-1的过表达质粒pcDNA3-FLAG-IEX-1和干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1，分别采用流式细胞术及四甲基偶氮唑盐比色法检测IEX-1对细胞周期、凋亡及增殖的影响。结果胃癌组织中IEX-1蛋白表达水平高于正常胃组织和慢性胃炎组织（P＜0.05），且随着病情进展，IEX-1表达水平有逐渐升高的趋势。相对于人正常胃黏膜细胞GES-1，胃癌细胞MKN28中IEX-1基因和蛋白表达更高（P＜0.05）。与对照组相比，IEX-1蛋白表达增高后S期细胞比例升高，G2期细胞比例降低，细胞增殖率升高，凋亡减少（P＜0.05），而干扰IEX-1蛋白表达后，G1期细胞升高，G2期细胞比例下降，细胞增殖率下降，细胞凋亡增加（P＜0.05）。结论IEX-1蛋白在胃癌组织中呈高表达，在人胃癌细胞中上调IEX-1蛋白能促进细胞增殖，发挥抗凋亡能力，干扰IEX-1蛋白表达能阻滞细胞周期进程，并诱导凋亡。

胃癌；即刻早期反应X-1；增殖；凋亡

胃癌是来于自胃黏膜上皮的恶性肿瘤，在全部恶性肿瘤中排第3位，是消化道最常见的恶性肿瘤，可见胃癌是威胁人类健康的常见病。人类即刻早期反应基因X-1（immediate early responsegene X-1，IEX-1）位于人染色体6p21.3，全长1.2 kb，表达含156个氨基酸残基的蛋白，分子量约为18 kD[1-2]。IEX-1表达有组织差异性，被证实是一种凋亡相关调节蛋白，在不同细胞和组织中能够正性或负性调控凋亡相关过程，参与很多肿瘤分子生物学过程[3-5]。但目前关于其在胃癌研究中的报道较少，在胃癌中的功能尚不清楚。本研究拟通过检测IEX-1蛋白在胃癌组织中的表达水平，并分析其对人胃癌细胞凋亡和增殖的影响，探讨其在胃癌进程中的作用，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 主要试剂和仪器 达尔伯克必需基本培养基（dulbecco's minimum essential medium，DMEM）购自美国Gibco公司，胎牛血清购自法国Biowest公司，兔抗人IEX-1多克隆抗体购自美国Sigma公司，鼠抗人Tunbulin单克隆抗体购自加拿大Fermentas公司，LipoTM2000转染试剂、逆转录试剂盒、实时荧光定量聚合酶链反应（quantitative real-time polymerase chain reaction，qRT-PCR）试剂盒及限制性内切酶均购自日本TaKaRa公司，pcDNA3-flag质粒、pLL3.7质粒、T4连接酶、DNA抽提试剂盒、凝胶回收试剂盒、即用二氨基联苯胺（Diaminobenzidine，DAB）显色剂、四甲基偶氮唑盐比色法[3-（4，5-dimethyl-2-thiazolyl）-2，5-diphenyl-2-H-tetrazolium bromide，MTT]试剂及碘化丙啶试剂均购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司，培养箱和超净工作台购自美国Thermo Forma公司，ABI PRISM 7700 qRT-PCR仪购自美国ABI公司，水平式琼脂糖凝胶电泳仪、垂直式电泳仪及湿式电转移均购自美国Bio-Rad公司，ACEA Novo CyteTM流式细胞仪购自杭州艾森生物有限公司，凝胶成像系统购自美国Gene公司，光学显微镜购自日本Nikon公司。所有引物委托北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司合成。

1.1.2 组织标本和细胞 为研究正常胃组织→慢性胃炎→胃癌过程中IEX-1蛋白的表达变化，在中南大学湘雅医学院附属海口医院2014年1月-2015年12月胃镜活检患者中收集10例正常胃组织、40例慢性胃炎组织及50例胃癌组织标本。所有患者签署标本研究知情同意书。人正常胃黏膜细胞GES-1购自上海拜力生物科技有限公司，胃癌细胞MKN28购自国家实验细胞资源共享平台。

1.2 方法

1.2.1 免疫组织化学法 采用二步法检测正常胃组织、慢性胃炎组织及胃癌组织中IEX-1蛋白的表达。4μm切片56℃过夜。次日常规脱蜡和去内源性过氧化物酶，加入三羟基甲胺 -盐酸缓冲盐溶液（Tris-HCl buffer saline，TBS）进行抗原修复。擦去组织周围TBS，置切片于湿盒内，滴加正常绵羊血清（1∶20），70μl/片，37℃、20 min。吸去切片上部分血清，滴加工作浓度兔抗人IEX-1多克隆抗体（1∶200），70μl/片，37℃、1 h后，4℃放置过夜。阴性对照用TBS代替一抗。次日滴加相对应工作浓度二抗，70μl/片，37℃、1 h，滴加DAB显色。开始出现背景时，用蒸馏水终止显色。苏木素复染后立即流水冲洗。将切片于56℃烤箱内烤干，中性树胶封片，光镜下观察。染色程度由2位病理医生在不知临床资料的情况下独立评价。400倍光镜下观察8个任一视野，得到染色强度和阳性细胞百分率。IEX-1染色评分由染色强度（0～3级：0级为阴性，1级为弱阳性，2级为中等阳性，3级为强阳性）和阳性细胞百分率（0～4级：0级为0%，1级为1%～25%，2级为26%～50%，3级为51%～75%，4级为76%～100%）的乘积得到，分为不同等级（0、1、2、3、4、6、8、9和12）。0级为阴性表达，1、2和3级为弱阳性表达，4和6级为中度阳性表达，8、9和12级为强阳性表达。

1.2.2 细胞培养 液氮冻存细胞拿出后迅速放于37℃水浴中溶解，使用DMEM培养基（含10%胎牛血清，1%抗生素）37℃、5%二氧化碳CO2、95%空气饱和湿度培养箱中培养。复苏次日更换新鲜培养基。细胞密度＞80%时需使用胰酶消化传代。传代比例1∶6～1∶4。

1.2.3 Western blot检测 在细胞样品中加入预冷的裂解液，超声破碎后4℃、13 000 r/min离心10 min；轻轻吸取上清，转移至新的离心管中置于冰上待用。使用BCA蛋白定量试剂盒通过标准曲线计算出样品的蛋白浓度。取等量蛋白样品（30μg），加入上样缓冲液，97℃加热6 min变性，室温冷却离心后上样。十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳结束后，采用电转仪将蛋白从分离胶转移至聚偏二氟乙烯膜（polyvinylidene fluoride，PVDF）膜上。转膜完成后，将PVDF膜封闭后加入一抗（1∶1 000，用封闭液稀释），4℃杂交过夜。加入适当比例稀释的二抗，室温孵育1 h，将电化学发光试剂盒的A液和B液等体积混合后均匀滴在PVDF膜上，放入暗盒中显影。使用Quantity One软件进行光密度分析。

1.2.4 qRT-PCR 在样品中加入1 ml Trizol，剧烈震荡混匀，室温放置5 min后加入200μl氯仿剧烈震荡，4℃静置5 min。4℃、12 000 r/min离心15 min，将约600μl上清液转移至新的无核糖核酸酶（Ribonuclease，RNase）1.5 ml离心管中。加入等体积氯仿，剧烈震荡，4℃静置2 min。4℃、12 000 r/min离心15 min，吸取上清液至新的无RNase 1.5 ml离心管中。按等体积加入异丙醇，上下颠倒充分混匀后于-20℃静置30 min。4℃、12 000 r/min离心10 min，弃上清，沉淀用75%预冷乙醇洗涤后，离心弃上清，充分干燥后加入适量焦碳酸二乙酯（diethy pyrocarbonate，DEPC）水溶解RNA并测定浓度。为防止DNA对逆转录的影响，要用脱氧核糖核酸酶消化提取的RNA中的DNA，其消化程序和反应液的量按说明书操作。按照逆转录试剂盒说明书操作将RNA逆转录为互补脱氧核糖核酸（complementary deoxyribonucleic acid，cDNA），即可作为qRT-PCR的反应模板。从美国国立生物技术信息中心获得IEX-1 mRNA的全长序列，利用Primer Blast设计引物序列。IEX-1正向引物：5'-CGGTCCTGAGATCTTCACCT-3'，反向 引 物 ：5'-TGGTGAGCAGCAGAAAGAGA-3'；GAPDH正向引物：5'-ACATGTTCCAATATGCTTCC-3'，反向引物：5'-TGGACTCCACCACGTACTCAG-3'。配置标准的PCR体系，以GAPDH作为内参进行相对定量，每组设3个复孔，于qRT-PCR仪上设置所需的反应条件，反应结束后读取数据。

1.2.5 构建pcDNA3-FLAG-IEX-1和pLL3.7-si-IEX-1真核表达载体 以MKN28 cDNA为模板，从NCBI获得IEX-1 mRNA的全长序列。NotⅠ：5'-ATAAGAATGCGGCCGCATGTGTCACTCTCGCAGCTgCCACC-3'；EcoRⅠ：3'-CCGGAATTCGCGAAGGCGgCCGGgTGTTGCTGGAGG-5'。配置标准的PCR体系，在PCR仪上设置所需的反应条件，将PCR产物与pcDNA3-flag质粒使用NotⅠ和EcoRⅠ双酶切。将上述酶切产物跑1%琼脂糖凝胶，切胶回收，使用T4Ligase 16℃连接过夜。连接产物转化DH5α，涂布氨苄平板。37℃培养过夜。挑取平板上长出菌落，质粒小提后送上海美吉生物医药科技有限公司测序。pLL3.7-si-IEX-1真核表达载体的构建方法相同，使用载体为pLL3.7，双酶切位点为HpaⅠ和XhoⅠ。干扰序列为250～270 kb，正向引物：5'-AAAAGgCTTCTCTTTCTGCTG-3'，反向引物：5'-CAGCAGA AAGAGAAGCCTTTT-3'。

1.2.6 细胞转染实验 转染前1 d传代MKN28细胞，转染时细胞密度需达80%～90%。严格按照LipoTM2000转染试剂的说明书进行操作。每个培养血（直径6 cm）细胞使用质粒量4μg。分别转染对照质粒 pcDNA3-flag、pLL3.7、过表达质粒 pcDNA3-flag-IEX-1及干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1。在转染后48 h检测IEX-1的蛋白表达水平，验证转染效率。

1.2.7 流式细胞术 将转染上述质粒48 h后的MKN28细胞进行流式细胞术检测，每个样品收集细胞5×106个，用磷酸盐缓冲液（phosphate buffered saline，PBS）洗细胞2次，2 000 r/min离心2 min，弃上清液。70%预冷乙醇固定过夜，4℃保存备用，染色前用PBS洗去固定液，弃上清液。每管中加RNase A，37℃水浴30 min，PI染色混匀，4℃避光30 min，上流式细胞仪检测细胞周期。实验重复3次。

1.2.8 MTT法 MTT法检测转染上述质粒48 h后的MKN28细胞。转染后的细胞用培养液配成单细胞悬液，以3 000个细胞/孔接种到96孔板，体积200μl/孔。每组均设置3个复孔，培养48h后加MTT溶液（5 mg/ml）20μl/孔。492 nm处检测吸光度值。

1.3 统计学方法

数据分析采用SPSS 21.0统计软件，计量资料以均数±标准差（±s）表示，用t检验或方差分析，两两比较用LSD-t检验。等级资料以频数表示，用Kruskal-WallisH检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 正常胃组织、慢性胃炎及胃癌组织中I EX-1的表达

IEX-1蛋白在各类组织中均有阳性表达（100/100）（见附表）。正常胃黏膜上皮细胞的胞质中IEX-1表达丰富（见图1A、B）；慢性胃炎组织中，肠上皮化生细胞胞质有中等量的IEX-1表达（见图1C、D）；而在胃癌组织中，IEX-1有强阳性表达（见图1E、F）。经Kruskal-WallisH检验，差异有统计学意义（H= 38.609，P=0.000），相对于正常胃组织和慢性胃炎组织，胃癌组织中IEX-1蛋白表达的阳性程度更高。

2.2 人胃正常黏膜细胞和胃癌细胞中I EX-1基因和蛋白表达水平

为进一步验证免疫组织化学结果，本实验选择人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN28进行qRT-PCR和Western blot检测。IEX-1基因和蛋白表达水平比较，经t检验，差异有统计学意义（t= 13.019和6.120，P=0.006和0.026），胃癌细胞MKN28中IEX-1基因和蛋白表达水平高于人正常胃黏膜细胞GES-1。见图2、3。

附表 不同组织中I EX-1蛋白表达程度的比较 例（%）

图1 I EX-1蛋白在正常胃组织、慢性胃炎及胃癌组织中的表达 （×10）

2.3 pcD N A3-FLAG-I EX-1和pLL3.7-si-I EX-1真核表达载体的构建和鉴定

为下一步了解IEX-1蛋白在胃癌进展中的意义，本实验构建IEX-1的过表达质粒pcDNA3-FLAGIEX-1和干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1。将NotⅠ和EcoRⅠ双酶切连接好的pcDNA3-FLAG-IEX-1质粒，经1%琼脂糖电泳后，紫外线下可见在靠近500 bp处有1条带，与IEX-1 mRNA的长度相符（见图4）。将双酶切鉴定正确的过表达质粒pcDNA3-FLAGIEX-1和提取好的干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1送上海美吉生物医药科技有限公司测序，应用Chromas软件读取测序结果，使用NCBI BLAST验证测序结果正确，说明pcDNA3-FLAG-IEX-11和pLL3.7-si-IEX-1真核表达载体构建成功。

图2 人胃正常黏膜细胞G ES-1和胃癌细胞M KN 28中I EX-1基因表达水平

图3 人胃正常黏膜细胞G ES-1和胃癌细胞M KN 28中I EX-1蛋白表达水平

图4 pcD N A3-FLAG-I EX-1真核表达载体双酶切鉴定结果

2.4 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染胃癌细胞M KN 28后I EX-1基因和蛋白表达水平的变化

为验证过表达质粒pcDNA3-FLAG-IEX-1和干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1在MKN28中的效果，将2种质粒转染胃癌细胞MKN28 48 h后，经qRT-PCR和Western blot检测IEX-1基因和蛋白的表达。3组IEX-1基因表达水平比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=3 438.589，P=0.000），过表达组转染48 h后IEX-1基因表达水平升高，而干扰组IEX-1基因表达水平降低（见图5）。过表达组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；干扰组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。3组IEX-1蛋白表达水平比较，经方差分析，差异有统计学意义（F= 311.85，P=0.000）。过表达组转染48 h后IEX-1蛋白表达水平升高，而干扰组IEX-1蛋白表达水平降低（见图6）。过表达组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；干扰组与对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。过表达组IEX-1基因和蛋白表达水平均高于对照组，而干扰组IEX-1基因和蛋白表达水平均低于对照组，说明重组质粒过表达和干扰效果显著。

2.5 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染后对胃癌细胞M KN 28细胞周期的影响

图5 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3. 7-si-I EX-1转染胃癌细胞M KN 28后I EX-1基因表达水平

图6 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染胃癌细胞M KN 28后I EX-1蛋白表达水平

质粒转染48 h后，流式细胞术检测各组细胞周期的变化。过表达组各期细胞比例比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=78.537，P=0.000），过表达组细胞合成期（synthesis phase，S）细胞比例升高，第二间隙期（gap phase 2，G2）细胞比例降低。过表达组S期与对照组S期比较，差异有统计学意义（P＜0.05）；过表达组G2期与过表达对照组G2期比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。第一间隙期（gap phase 1，g1）和G2/G1期细胞比例变化不大，经方差分析，差异无统计学意义（F=0.237，P=0.572）。过表达IEX-1后，MKN28细胞增殖更加旺盛。干扰组各期细胞比例比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=88.324，P=0.000），干扰组G1期细胞比例升高，G2期细胞比例下降。干扰组G1期与干扰对照组G1期比较，差异有统计学意义（P＜0.05），干扰组G2期与干扰对照组G2期比较，差异有统计学意义（P＜0.05）。干扰组、干扰对照组各期细胞比例比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=54.779，P=0.000），干扰组S期和G2/G1期细胞比例有所下降。干扰组S期与干扰对照组S期比较，差异无统计学意义（P＞0.05），干扰组G2/G1期与干扰对照组G2/G1期比较，差异无统计学意义（P＞0.05），说明干扰IEX-1蛋白表达后，MKN28细胞增殖活动受抑制，使细胞滞留于G1期。见图7。

2.6 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染后对胃癌细胞M KN 28凋亡的影响

质粒转染48 h后，流式细胞术检测各组细胞凋亡变化。各组凋亡率比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=107.892，P=0.000）。过表达组与过表达对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），干扰组与干扰对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），说明过表达组凋亡水平低于过表达对照组，而干扰组凋亡水平高于干扰对照组。见图8。

2.7 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染后对胃癌细胞M KN 28增殖的影响

质粒转染48 h后，MTT法检测各组细胞增殖变化情况，各组增殖率比较，经方差分析，差异有统计学意义（F=88.643，P=0.000）。过表达组与过表达对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），干扰组与干扰对照组比较，差异有统计学意义（P＜0.05），说明过表达组细胞增殖率高于过表达对照组，而干扰组细胞增殖率低于对照组。见图9。

图7 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染后对胃癌细胞M KN 28细胞周期的影响

图8 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染后对胃癌细胞M KN 28凋亡的影响（±s）

3 讨论

胃癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，更是引起恶性肿瘤患者死亡的第2大原因。我国是胃癌的高发区，其发病率和死亡率高居前列[6-7]。多年来胃癌治疗后的5年生存率一直＜24%[8]。尽管目前有很多关于胃癌发生、发展过程中的知识被发现和了解，但是能够对患者更有效的胃癌基因治疗的靶向分子仍在寻找中。

图9 过表达质粒pcD N A3-FLAG-I EX-1和干扰质粒pLL3.7-si-I EX-1转染后对胃癌细胞M KN 28增殖的影响（±s）

IEX-1首次发现于人类X射线照射引起的肿瘤细胞中[1-2]，其表达有组织差异性，在皮肤、呼吸道、胃肠道、泌尿生殖系统的上皮细胞，以及多组织或器官的血管内皮细胞中广泛表达，在胰腺和乳腺中高表达；在肝、肺、淋巴结、胎盘中表达较弱；而在胸腺、睾丸、卵巢、心肌、骨骼肌、脾脏中未检测到[9-10]。同样在不同的癌组织中，其表达也有差异。仅有38.3%的卵巢癌表达IEX-1[11]，胰腺癌中IEX-1则有53%的阳性表达率[12]，并通过ERK磷酸化途径促进胰腺细胞的恶性转化[13]；在乳腺癌组织和乳腺癌细胞株中IEX-1表达大幅度下调[14]；同样直肠癌组织中IEX-1的表达比癌旁正常组织降低[15]，而在骨肉瘤组织中IEX-1则呈高阳性表达[16]。目前，鲜有关于成人正常胃组织和胃癌组织中IEX-1蛋白表达的报道，且存在相互矛盾的情况。

多项研究表明，IEX-1是一种凋亡相关调节蛋白[17-19]。其可正性或负性调节细胞凋亡功能[20]。IEX-1在293细胞中通过抑制核转录因子-κB（nuclear transcription factor-κB，NF-κB）抑制剂IkBα的降解，下调基础水平和诱导水平NF-κB的活性，从而对抗NF-κB的抗凋亡作用[21]。胃泌素17对表达野生型CCK2受体结肠癌细胞的促凋亡作用也是通过IEX-1介导，依赖NF-κB抗凋亡途径而产生[22]。转染IEX-1基因的人皮肤角质形成细胞，相对于未转染细胞，细胞培养液中Caspase-3的活性增加[23]。而更早期的报道则显示，IEX-1能够抵抗TNF-α诱导的细胞凋亡作用[24]。目前关于IEX-1调节胃癌细胞生物学行为的研究，尚无定论。

本研究发现，正常胃组织中有IEX-1蛋白的表达，与FELDMANN等[9]报道一致，但胃癌组织的IEX-1蛋白表达水平要高于正常胃组织和慢性胃炎组织，为进一步验证免疫组织化学结果，本实验用qRT-PCR和Western blot检测人正常胃黏膜细胞GES-1和胃癌细胞MKN28中IEX-1基因和蛋白表达水平，结果同样显示其在胃癌细胞中呈现更高表达状态。另外，本研究结果还发现，正常胃组织发展到慢性胃炎，再至胃癌的疾病进展过程中，IEX-1的表达水平有逐渐升高的趋势，揭示IEX-1蛋白的升高可能是胃癌发生、发展过程中潜在机制之一。为探究IEX-1在胃癌进程中所起的作用，考虑其为凋亡相关调节蛋白，本实验通过外源性导入过表达质粒pcDNA3-FLAG-IEX-1和干扰质粒pLL3.7-si-IEX-1，使用流式细胞术检测IEX-1蛋白对胃癌细胞MKN28细胞周期和凋亡的影响，结果证实上调IEX-1蛋白表达能使S期细胞比例升高，G2期细胞比例降低，细胞凋亡减少，说明过表达IEX-1蛋白后，MKN28细胞增殖更加旺盛。而将IEX-1蛋白表达干扰后，胃癌细胞发生G1期阻滞，增殖受抑制并且诱导细胞凋亡。MTT法则进一步验证IEX-1蛋白促进胃癌细胞增殖的作用，说明IEX-1在调控胃癌细胞的凋亡和增殖发生转换过程中发挥重要作用。

综上所述，IEX-1蛋白在胃癌组织中呈高表达水平状态，在人胃癌细胞中上调IEX-1蛋白表达能够促进细胞增殖，发挥抗凋亡能力，干扰IEX-1蛋白表达能够阻滞细胞周期进程并诱导凋亡。因此，IEX-1蛋白在胃癌进程中发挥癌蛋白的作用。下一步笔者将就IEX-1在胃癌中相关的分子机制及下游信号通路进行研究，为IEX-1作为胃癌基因治疗的靶向分子提供科学理论依据。

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（童颖丹 编辑）

Expression of IEX-1 protein ingastric carcinoma and its effect on apoptosis and proliferation of humangastric cancer cells*

Shan-shan Mao,Xiao-zhen Cheng,Rong-hua Cui,Jiang-hua Yuan,Mei-qing Wang
(Department of Oncology,Haikou Hospital Affiliated to Xiangya Medical College of Central South University,Haikou,Hainan 570208,China)

ObjectiveTo reveal the expression of IEX-1 protein ingastric cancer tissues and cell lines, and investigate the effect of IEX-1 on the proliferation and apoptosis of humangastric cancer cells.MethodsImmunohistochemistry was used to detect IEX-1 protein expression in 100 samples ofgastric mucosal biopsy. IEX-1gene and protein expressions were detected by fluorescence qRT-PCR and Western Blot respectively in normalgastric mucosagES-1 cells andgastric cancer MKN28 cells.pcDNA3-FLAG-IEX-1 plasmid and pLL3.7-si-IEX-1 plasmid were transfected into MKN28 cells respectively,and then cell cycle,apoptosis and proliferation were detected by flow cytometry and MTT assay.MethodsThe expression of IEX-1 protein in thegastric cancer tissues was higher than that in the normalgastric tissues and the chronicgastritis tissues (P＜0.05),and the expression level of IEX-1 wasgradually increased with the progress of the disease.The expressions ofIEX-1gene and protein in thegastric cancer MKN28 cells were higher than those in the normalgastric mucosalgES-1 cells (P＜0.05).Compared with the controlgroup,the increased expression of IEX-1 protein could increase the proportion of the cells in S phase,decrease the proportion of the cells ing2 phase,increase the rate of cell proliferation,and decrease apoptosis (P＜0.05).After the expression of IEX-1 protein was interfered,the percentage ofg1 phase cells increased,that ofg2 phase cells decreased, the rate of cell proliferation decreased,apoptosis increased (P＜0.05).ConclusionsIEX-1 protein is highly expressed ingastric cancer tissues.Up-regulation of IEX-1 protein expression can promote the proliferation ofhumangastric cancer cells and play an anti-apoptotic role.Interfering with the expression of IEX-1 protein could block cell cycle progression and induce apoptosis.

gastric cancer;IEX-1;proliferation;apoptosis

R735.2

A

2017-03-20

2013年海南省海口市重点科技计划项目（No：2013-70）

10.3969/j.issn.1005-8982.2017.20.006

1005-8982（2017）20-0026-08