卢 炀，李 林△，高斐宏，王慧颖，尤晓苗，李小薇(. 内蒙古医科大学，呼和浩特 0000； . 天津中医药大学，天津 30093)

【实验研究】

蒙药十三味红花密诀丸对过敏性鼻炎大鼠治疗作用的研究❋

卢 炀1，李 林1△，高斐宏1，王慧颖1，尤晓苗1，李小薇2
(1. 内蒙古医科大学，呼和浩特 010010； 2. 天津中医药大学，天津 300193)

目的：观察蒙药十三味红花密诀丸对AR大鼠血清中组胺、白三烯的影响，探讨其治疗AR的作用机制。方法：建立卵清蛋白诱导性过敏性鼻炎大鼠模型，并设正常对照组、模型对照组、鼻炎康组(409 mg·kg-1)、十三味红花密诀丸高剂量组(1100 mg·kg-1)、十三味红花密诀丸中剂量组(550 mg·kg-1)、十三味红花密诀丸低剂量组(275 mg·kg-1)，连续喂药21 d后，HE染色观察大鼠鼻黏膜病理切片，用酶联免疫法(ELISA)测定大鼠血清组胺与白三烯的含量。结果：蒙药各剂量组和鼻炎康组行为学评分均得到有效改善，通过组间比较，蒙药高剂量组、中剂量组行为学改善程度明显优于低剂量组和鼻炎康组；通过HE染色观察，2种药物均能不同程度地改善鼻黏膜的充血、水肿、炎性损伤；蒙药各剂量组与鼻炎康组还能够显著改善AR大鼠血清中组胺、白三烯的水平，组间比较差异有统计学意义。结论：十三味红花密诀丸不但能显著改善过敏性鼻炎的典型症状，也能改善AR大鼠血清中组胺、白三烯水平，治疗过敏性鼻炎疗效确切。

蒙药；十三味红花密诀丸；卵清蛋白诱导性鼻炎；过敏性鼻炎；组胺；白三烯

过敏性鼻炎西医学又称之为变应性鼻炎(allergic rhinitis,AR)，是以 IgE为主导、多种免疫活性细胞和细胞因子参与的非感染性I型变态反应性疾病[1]。其典型症状是鼻塞、鼻痒，反复发作的连续喷嚏以及流清涕。过敏性鼻炎现已成为常见的鼻科疾病，被列为21世纪重点研究和防治的三大疾病之一[2]。蒙药十三味红花密诀丸，蒙语叫做敖必德森古日古木-13，首见于《医诀补遗》，是蒙医常用方剂，临床用于治疗高血压性、神经性头痛、过敏性鼻炎等效果良好。本实验通过用十三味红花密诀丸治疗卵清蛋白(OVA)诱导的过敏性鼻炎大鼠，对十三味红花密诀丸的疗效进行研究，并对其药物组成进行简单探讨，现报道如下。

1 材料

1.1 实验动物

清洁级成年Wistar大鼠90只，雌雄各半，体质量(200±20)g，饲养室温(23±2)℃、相对湿度(50±5)%条件下，每笼6只，保持室内安静，适应性喂养1周后进行实验，由内蒙古大学动物实验中心提供(合格证号SCXK(蒙2002-0001))。

1.2 药物、试剂及仪器

十三味红花密诀丸(敖必德森-古日古木-13，内蒙古民族大学附属医院蒙药制剂室，批号哲卫准字9604-12，每日2次，每次2 g)，鼻炎康片(佛山德众药业有限公司，批号国药准字Z20023063，每日3次，每次4片)，卵清蛋白(OVA，SIGMA公司，批号A5378-250MG)，组胺和白三烯 ELISA试剂盒(武汉基因美生物科技有限公司，批号20130810)，氢氧化铝(Al(OH)3，国药集团化学试剂有限公司，批号20130814)，生理盐水(四平巨能药业，生产批号A13091322)，水合氯醛(天津市福晨化学试剂厂，批号201121017)，DAB显色试剂盒(迈新试剂，产品编号DAB-0031/1031)，PBS缓冲液(迈新试剂)，柠檬酸缓冲液(迈新试剂)，电子天平(梅特勒-托利多 PL403)，光学显微镜(CX21型 OLYMPUS公司)，中药粉碎机(型号LX-08B)，石蜡包埋机(德国LEIKA，型号EG1150H+C)，医用微波炉(G80F23CSP-Q5)。

2 方法

2.1 AR大鼠模型的建立及分组[3-4]

大鼠造模分为腹腔注射致敏与鼻腔滴注激发两个阶段。腹腔注射致敏是将卵清蛋白(OVA)0.3 mg与氢氧化铝[Al(OH)3]30 mg溶于1ml生理盐水中制成悬浊液。除空白组外，其他大鼠均进行腹腔注射，2 d 1次共7次；空白组仅以氢氧化铝[Al(OH)3]30 mg+生理盐水1ml混匀后腹腔注射，2 d 1次共7次。鼻部滴注激发是全身抗原攻击完成后，以0.5%OVA+生理盐水混合液鼻腔滴注，每侧鼻孔滴加20 μL，每日2次共7 d。空白组只用生理盐水滴注。于末次鼻部滴注激发后30 min内观察动物搔鼻、喷嚏及流涕等行为。

根据鼻部症状评分标准[5]制定计分方法：鼻痒：轻度：轻擦鼻几次，1分；重度：到处摩擦，抓挠鼻面部不止，2分;喷嚏：1～3个1分，4～10个2分，11个以上3分;鼻涕：流至前鼻孔1分，超过前鼻孔2分，流涕满面3分。采用叠加量化计分法，总分多于5分则表示造模成功。

根据症状评分造模成功率为80%。取60只造模成功大鼠随机分为模型、蒙药高剂量、蒙药中剂量、蒙药低剂量与鼻炎康5组，其余造模未成功大鼠作为空白组共6组。

2.2 给药方法

所有药物灌胃前均用中药粉碎机打成细粉，并用生理盐水溶解。空白组正常喂食、给水,模型组正常喂食、给水,蒙药十三味红花高剂量组给予十三味红花密诀丸悬浊液(1100 mg·kg-1)灌胃，蒙药中剂量组给予十三味红花密诀丸悬浊液(550 mg·kg-1)灌胃，蒙药低剂量组给予十三味红花密诀丸悬浊液(275 mg·kg-1)灌胃，鼻炎康组给予鼻炎康悬浊液(409 mg·kg-1)灌胃。各治疗每天灌胃1次，连续灌胃21 d。

2.3 标本采集

血清：于末次灌胃后1 h内将各治疗组大鼠用10%水合氯醛腹腔麻醉，抽取右心室血4ml，室温下凝固2 h，置于3000 r/min的离心机中15 min，将得到的血清转至新管并置于4 ℃冰箱内保存待测。

组织标本：采集静脉血后将大鼠处死剥离上颌骨，沿鼻中隔两上沿剪开，取完整鼻中隔及下鼻甲，剥取鼻黏膜组织放入10%甲醛溶液中固定24 h，常规切片并HE染色，在显微镜下观察鼻黏膜组织病理学的变化。

2.4 指标检测

2.4.1 大鼠症状观察 观察大鼠搔鼻、喷嚏、流涕等过敏性鼻炎的典型症状。

2.4.2 大鼠鼻黏膜病理切片观察 在CX21型奥林巴斯显微镜下(200倍)观察鼻黏膜病理切片的病理改变。

2.4.3 对大鼠血清组胺、白三烯含量的测定 采用酶联免疫分析(ELISA)试剂盒进行检测，具体步骤参考试剂盒说明书。

2.5 统计学方法

3 结果

3.1 大鼠症状观察

以模型组大鼠鼻部症状记分作为治疗前结果，以治疗组模型大鼠鼻部症状记分作为治疗后结果，分别记录第7、14、21天的行为学评分并进行比较。

组内比较，给药7 d后，蒙药各剂量组和鼻炎康组大鼠行为学评分均有所降低，与给药前比较差异有统计学意义(P<0.05)；给药14 d后，蒙药各剂量组和鼻炎康组大鼠行为学评分继续降低，与给药7 d后行为学评分比较差异有统计学意义(P<0.05)；给药21 d后，蒙药各剂量组和鼻炎康组大鼠行为学评分与给药14 d后行为学评分比较差异有统计学意义(P<0.05)。

组间比较，统计并比较各治疗组给药 7、14、21 d的行为学评分，发现各治疗组行为学评分均有不同程度改善，与模型组比较差异有统计学意义(P<0.05)，其中蒙药高剂量组、中剂量组改善明显，与低剂量组、鼻炎康组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

表1显示，十三味红花密诀丸与鼻炎康均能够有效缓解过敏性鼻炎的典型症状，但十三味红花密诀丸在改善过敏性鼻炎症状方面药效优于鼻炎康。

表1 给药后第1、7、14、21天大鼠行为评分比较分)

注：与空白组比较：△P<0.05；与模型组同时间点比较：*P<0.05；与给药前比较：▽P<0.05；与本组给药后7 d比较：#P<0.05；与本组给药后14 d比较：▲P<0.05；与低剂量组、鼻炎康组同时间点比较：aP<0.05

3.2 鼻黏膜病理学观察

图1显示，镜下可见空白对照组大鼠鼻黏膜层结构正常，仅见个别嗜酸性粒细胞(EOS)；模型组大鼠鼻黏膜上皮部分被破坏，可见大量EOS细胞及其他炎性细胞浸润；蒙药高剂量组鼻黏膜上皮部分完整，镜下可见少量EOS细胞；蒙药中、小剂量组鼻黏膜镜下可见结构破坏，可发现坏死，黏膜下层可见许多EOS细胞，小剂量组更为显著；鼻炎康组鼻黏膜上皮部分完整，结构基本完整，可见少量EOS细胞。

图1 各组大鼠鼻黏膜病理切片图(HE×200)注：A.正常组；B.模型组；C.蒙药高剂量组；D.蒙药中剂量组；E.蒙药低剂量组；F.鼻炎康组

3.3 大鼠血清组胺、白三烯表达比较

表2显示，造模后模型组大鼠血清中组胺、白三烯指标明显上升，与空白组大鼠比较差异有统计学意义(P<0.01)；灌胃21 d后，蒙药各剂量组、鼻炎康组大鼠血清中组胺、白三烯指标水平较模型组明显下降，差异有统计学意义(P<0.05)，与空白组比较差异无统计学意义(P>0.05)；且各治疗组间比较差异无统计学意义(P>0.05)。

表2 蒙药十三味红花密诀丸对AR大鼠血清组胺、白三烯水平的影响

注：与空白组比较：△△P<0.01；与模型组比较：*P<0.05

4 讨论

组胺是过敏性鼻炎发生过程中的一种重要炎性介质，是由嗜碱粒细胞和肥大细胞脱颗粒后产生，可作用于H1受体，从而引起血管扩张、血管壁通透性增高、腺体分泌增多等症状。白三烯也是过敏性鼻炎发生过程中的一种重要炎性介质，主要由嗜酸粒细胞和巨噬细胞合成与释放[6]。 白三烯是目前已知的最强气道刺激物，较组胺强100～1000倍，可促进气道收缩。在炎性反应中，可促进黏液的分泌、水肿和增加血管的通透性，进而促进鼻腔黏膜的充血和气流受阻[7]。

十三味红花密诀丸由红花、当药、制泡囊草、金腰子、熊胆、制木鳖子、制石花、旋覆花、煅龙骨、制绵羊颅骨、草乌、查干泵嘎、制炉甘石13味药物组成。方中红花活血止痛，当药抑制希拉清热，龙骨杀黏止痛，草乌杀黏消炎，金腰子抑制希拉清热，石花清热解毒，旋覆花杀黏止痛燥黄水，炉甘石清肝明目，木鳖子抑制希拉，泡囊草杀黏消肿清润，熊胆清希拉。本方多采用活血化瘀药，整方配伍清热、杀黏、调理三根平衡，是蒙医学中治疗偏头痛、高血压及各类鼻炎的经典方剂。现代药理学研究表明，活血化瘀药物能够改善血液循环，抑制炎性反应的渗出和增生，抑制增生和变性结缔组织，对炎性因子介导的过敏性疾病有良好的作用，对神经系统和增生性疾病也有作用[7]。本研究中，蒙药各剂量组过敏性鼻炎模型大鼠经灌胃治疗后，典型症状出现次数明显较模型组少，说明十三味红花密诀丸治疗过敏性鼻炎具有良好的作用。

本次研究发现，十三味红花密诀丸和鼻炎康均能够有效且持续地缓解过敏性鼻炎的典型症状。HE染色的病理切片也说明，十三味红花密诀丸对过敏性鼻炎引起的炎症因子释放、水肿等症状有良好的缓解作用。通过组间结果比较说明，十三味红花密诀丸对过敏性鼻炎典型症状的改善程度明显优于鼻炎康，2种药物均能改善AR大鼠血清中组胺、白三烯水平，差异无统计学意义，疗效大致相同。

十三味红花密诀丸作为蒙医药学中的经典方剂，由于客观条件有限，对其的研究及推广很少。本研究旨在通过与鼻炎康片进行比较，观察十三味红花密诀丸治疗过敏性鼻炎的疗效。通过对研究结果分析，说明蒙药十三味红花密诀丸对过敏性鼻炎具有良好的疗效。

[1] 那木生加甫,巴图孟克.蒙药治疗过敏性鼻炎的体会[J]. 中国民族医药杂志, 2011, 17(8): 5.

[2] 中华耳鼻咽喉头颈外科杂志编辑委员会.变应性鼻炎的诊治原则和推荐方案[J].中华耳鼻咽喉头颈外科杂志,2005,40(3):166-167.

[3] 赵秀杰,董震,杨占泉,等.鼻超敏反应实验模型的建立[J].中华耳鼻咽喉科杂志,1993，28(1)：17-18

[4] 李颖.雷公藤甲素对变应性鼻炎大鼠iNOS和Eotaxin及NF-κB影响的研究[D]. 郑州：郑州大学, 2007.

[5] 柴江平,刘仁平,葛海生,等.柴新鼻敏康对大鼠变应性鼻炎的治疗作用[J]. 中国中医基础医学杂志,2012,18(8):884-885.

[6] BUSSE W, KRAFT M. Cysteinyl leukotrienes in allergic inflammation: strate-gic target for therapy[J]. Chest,2005,127(4):1312-1326.

[7] 姜慧,贾飞飞,申旭波，等.变应性鼻炎的现况调查[J].中国医药导报,2009,6(16):186-187.

Study on Mongolian Medicine Thirteen Flavor Safflower Secret Pill on the Therapeutic Effect of Allergic Rhinitis in Rats

LU Yang1, LI Lin1△, GAO Fei-hong1, WANG Hui-ying1, YOU Xiao-miao1, LI Xiao-wei2
(1.InnerMongoliaMedicalUniversity,Hohhot,InnerMongolia010110,China; 2.TianjinUniversityofTraditionalChineseMedicine,Tianjin300193,China)

Objective: To observe the influences of Histamine and Leukotrienes on Mogolian Thirteen Safflower Mijue Pill Treatment of Allergic Rhinitis in order to study the mechanism of AR. Methods:The establishment of ovalbumin-induced rat model of AR, and set up the normal control group, model group, Mongolian high(1100 mg·kg-1)，Mongolian medium(550mg·kg-1)， Mongolian low(275mg·kg-1)and Biyankang group(409 mg·kg-1). Feeding drugs for 4 weeks, HE observed Nasal pathologic morphology of the organization. Determination of serum histamine and leukotrienes rats by ELISA. Results: Mongolian medicine groups and Biyankang group behavior scores were improved, through the comparison between the two groups, the Mongolian medicine high dose group behavior improved significantly better than the low dose group, Biyankang group; By HE staining, two kinds of drugs can improve nasal congestion, edema and inflammatory damage to varying degrees; Mongolian medicine in each dose group and rhinitis Kang group can significantly improve the AR rat serum histamine, leukotriene levels. And there was no significant difference between groups. Conclusion: Mongolian medicine thirteen flavor safflower secret pill can not only improve the allergic rhinitis, also can improve the level of serum histamine and leukotriene AR in rats, the treatment effect of allergic rhinitis exactly.

Mogolian Medicine; Thirteen Safflower Mijue Pill; Ovalbumin induced rhinitis; Allergic Rhinitis; Histamine; Leukotriene

卢 炀(1989-),男,内蒙古赤峰人，医学硕士，从事蒙医传统方剂治疗过敏性鼻炎的相关研究。

△通讯作者：李 林(1965-),男,内蒙古呼和浩特人，教授，医学硕士，从事中医内科学、免疫学的临床与研究，Tel:13947185566,E-mail:lilin5566888@163.com。

R291.2

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1006-3250(2017)08-1085-03

2017-01-23