王丽红 任东红 禇菲菲 张志玲

(郑州大学附属郑州中心医院消化科，河南 郑州 450000)

PPAR-γ和survivin基因表达与直肠癌进展的关系

王丽红 任东红 禇菲菲 张志玲

(郑州大学附属郑州中心医院消化科，河南 郑州 450000)

目的探讨过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPAR)-γ和存活素(survivin)基因表达与直肠癌进展的关系。方法选取该院自2011年5月至2015年5月临床以及病理资料均齐全并经手术切除方式获得的直肠癌患者大体石蜡标本85例，取同期手术切除的腺瘤组织82例以及同期接受痔上黏膜环切手术治疗后的良性病变组织80例。采用免疫组织化学法分析PPAR-γ及survivin蛋白表达，分析其与患者病理特征的关系，采用Logistic回归分析PPAR-γ及survivin蛋白表达的相关因素。结果癌组织的PPAR-γ及survivin蛋白表达的阳性率明显高于正常组织及腺瘤组织(P<0.05)。正常组织与腺瘤组织PPAR-γ及survivin蛋白表达的阳性率比较差异无统计学意义(P>0.05)。直肠癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表达与病理情况的分化程度、淋巴结转移及Dukes分级有关，而与年龄及性别无关。Logistic回归分析法显示，影响直肠癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表达的相关因素有低分化、有淋巴结转移以及Dukes分级为C～D级。结论PPAR-γ和survivin在直肠癌患者组织中高表达，与直肠癌患者的疾病进展有较大关联。

过氧化物酶体增殖因子活化受体γ；存活素；直肠癌

过氧化物酶体增殖因子活化受体(PPAR)-γ作为过氧化物酶体自身增殖物的其中一种激活受体，对部分肿瘤细胞的生长以及细胞周期等方面的活动存在一定影响，而存活素(survivin)是一种近期新发现的凋亡抑制类蛋白，通常不表达于正常组织内，却在特定肿瘤细胞中呈广泛性表达〔1〕。有报道指出，深入研究并掌握以上两种基因表达对直肠癌肿瘤细胞的增殖抑制作用以及凋亡活动有促进效果，进而提高临床治疗敏感性〔2〕。本文分析PPAR-γ和survivin的表达及二者与直肠癌进展的关系。

1 资料与方法

1.1临床资料 选取郑州大学附属郑州中心医院自2011年5月至2015年5月临床以及病理资料均齐全并经手术切除方式获得的直肠癌患者大体石蜡标本85例，其中男44例，女41例；年龄40～82〔平均(61.51±7.92)〕岁；患者均通过具备丰富临床经验的两位病理医师进行独立诊断并复查，最终给予确诊。其中含管状腺癌60例，乳头状腺癌11例，黏液腺癌10例，印戒细胞癌4例；高分化30例，中分化32例，低分化23例；Dukes分级：A级21例，B级24例，C级26例，D级14例；淋巴结转移情况：无转移67例，有转移18例。按照正常、腺瘤、高、中、低分化以及转移癌的次序，制作出2个7×8规格点阵组织芯片，芯片直径2.0 mm，片厚4 mm。同时选取同期手术切除的腺瘤组织82例，其中男42例，女40例；年龄39～81〔平均(62.53±7.31)〕岁。并选取同期接受痔上黏膜环切手术治疗后的良性病变组织80例，男41例，女39例；年龄41～80〔平均(60.36±9.01)〕岁。不同组织标本对应患者的年龄及性别差异无统计学意义(P>0.05)。本研究经医院伦理委员会批准。

1.2研究方法 以链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶(SP)法进行免疫组织化学法染色，其中试剂规格：兔抗PPAR-γ多克隆抗体以及survivin均为美国Santa cruz公司生产，且抗体工作浓度设置为1∶100，免疫组化检测所用试剂盒为福州迈新公司生产，其具体步骤需严格根据说明书操作。结果评定：PPAR-γ蛋白于细胞中定位通常为细胞核，表现为棕黄颗粒状；survivin蛋白定位在细胞质或细胞膜之上，极少数细胞核内可见其弱表达，属于散在型阳性表达形式。借助高倍镜观察，随机对5个视野进行计数，分别计算出其阳性细胞数及总细胞数，并计算阳性细胞所占比例。评定标准：阳性细胞率>90%为阳性，反之为阴性。

1.3统计学方法 应用SPSS21.0软件进行χ2检验、Logistic回归分析。

2 结 果

2.1不同组织PPAR-γ及survivin蛋白表达的阳性率比较 癌组织PPAR-γ及survivin蛋白表达的阳性率〔61例(71.76%)，63例(74.12%)〕明显高于正常组织〔1例(1.25%)，2例(2.50%)〕及腺瘤组织〔5例(6.10%)，4例(4.88%)〕(P<0.05)。正常组织与腺瘤组织比较差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2PPAR-γ及survivin蛋白表达与直肠癌患者病理情况的关系 见表1。直肠癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表达与分化程度、淋巴结转移及Dukes分级有关(P<0.05)，而与年龄及性别无关。

表1 PPAR-γ及survivin蛋白表达与直肠癌患者病理情况的关系〔n(%)〕

2.3影响直肠癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表达的Logistic回归分析 影响直肠癌患者PPAR-γ及survivin蛋白表达的相关因素有低分化、有淋巴结转移以及Dukes分级为C～D级。见表2。

表2 影响直肠癌患者PPAR-γ、survivin蛋白表达的Logistic回归分析

3 讨 论

临床治疗直肠癌通常以手术方式为主，但是由于患者术后易出现复发现象，因此，医生多于术前对患者进行放、化疗等形式治疗，以期提高临床治疗效果。但临床研究统计发现，即使结合其他多种治疗手段进行综合治疗，患者的复发以及转移等情况仍未得到有效改善〔3〕。近期研究表明，直肠癌整个发展过程中有多种蛋白以及基因的参与，其自健康组织发展为癌细胞需经历多个阶段，且有关其发病的一项重要机制在于患者细胞凋亡存在调节紊乱现象〔4〕。找出和直肠癌发病存在重要关联的新型标志物，将其作为疾病治疗的靶点，有助于临床对直肠癌患者病情诊断以及预后效果预估等工作。有报道指出PPAR-γ在诸多肿瘤中高表达，且survivin基因不仅广泛表达于各类肿瘤内，且其凋亡作用最强〔5〕。

本研究结果符合曾锦荣等〔6〕的报道结果，提示PPAR-γ和survivin基因表达在直肠癌患者中具有更高的阳性率，可能与直肠癌进展存在一定联系。原因主要可能是因为PPAR-γ和survivin的生化作用机制发挥的调节作用而导致。其中PPAR-γ属于通过配体进行激活的一种核转录性因子，是核激素类受体超家族一员，具备调节脂质以及糖等代谢作用，同时其对脂肪分化以及能量平衡等均发挥关键性调节功能。临床研究发现，PPAR-γ可表达于人类多种肿瘤内，可作为多种肿瘤细胞临床病理分期和预后效果评估等工作的评定指标〔7〕。本研究发现，对正常健康直肠组织以及腺瘤组织进行检测，其内PPAR-γ蛋白均呈低表达状态，但直肠癌患者肿瘤组织内的PPAR-γ却为高表达，进一步证实PPAR-γ表达和直肠癌发病直接相关。而survivin是一种典型的凋亡抑制类蛋白，研究发现该基因在正常组织中不表达，而是选择性单纯表达于恶性肿瘤内。目前有关survivin基因的研究结果显示，其属于IAP家族，能够抑制细胞凋亡，其在人肝癌、肺癌以及结肠癌等多种恶性肿瘤中均呈现高表达状态〔8〕。本研究结果证实survivin基因于直肠癌发病早期激活，从而形成癌症期的大量表达。具体来说，survivin基因作用机制在于其能够阻止细胞凋亡，并延伸肿瘤细胞整体生存期，进而加大该细胞发生基因改变的概率，从而促进直肠癌发展。由此可知，survivin基因的被激活时间为直肠癌发病初期，进而可将survivin当做直肠癌发病早期高效标志物。

本研究结果还符合赵长林等〔9〕的报道。随着低分化、有淋巴结转移及Dukes分级为C～D级的情况发生，患者的病情严重程度也随之变重，这将促进PPAR-γ及survivin蛋白的进一步表达。同时，也可能因为直肠癌患者PPAR-γ和survivin基因二者表达之间同样存在一定关联，预示着两种指标在影响直肠癌发病以及病情发展等方面可能存在一定协同作用，但具体机制目前尚未明确，仍需深入研究总结。

1Wang W，Shao Y，Tang S，etal.Peroxisome proliferator-activated receptor-γ (PPARγ) Pro12Ala polymorphism and colorectal cancer (CRC) risk〔J〕.Int J Clin Exp Med，2015；8(3)：4066-72.

2陈倩倩，毋永娟.结直肠癌肿瘤干细胞标志物的研究进展〔J〕.基础医学与临床，2014；34(3)：422-5.

3尹 鹏，胡 君，储著凌，等.替米沙坦通过上调PPAR-γ促进结肠癌SW480细胞TIMP-1表达的实验研究〔J〕.西部医学，2014；26(2)：160-2.

4章向成，陈光侠，张 红，等.尼美舒利通过PPA Rγ途径抑制结肠癌细胞增殖〔J〕.重庆医学，2015；44(4)：446-9.

5Anderson JR，Mortimer K，Pang L，etal.Evaluation of the PPAR-γ agonist pioglitazone in mild asthma：a double-blind randomized controlled trial〔J〕.PLoS One，2016；11(8)：e0160257.

6曾锦荣，莫碧文，王绩英，等.过氧化物酶体增殖因子激活受体激动剂对A549细胞裸鼠移植瘤Caspase-3、Survivin表达的影响〔J〕.中国药理学通报，2013；29(10)：1418-22.

7郭建霞，张小云，赵春林，等.Wnt/β-catenin信号通路相关因子与结肠癌患者预后的相关性研究〔J〕.河北医药，2016；38(3)：371-3.

8Kole L，Sarkar M，Deb A，etal.Pioglitazone，an anti-diabetic drug requires sustained MAPK activation for its anti-tumor activity in MCF7 breast cancer cells，independent of PPAR-γ pathway〔J〕.Pharmacol Rep，2016；68(1)：144-54.

9赵长林，孙 壮，张甘露，等.直肠癌组织PI3K和Survivin及VEGF表达与肿瘤侵袭转移相关性的探讨〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2012；19(1)：63-7.

〔2016-12-11修回〕

(编辑 袁左鸣/滕欣航)

王丽红(1975-)，女，硕士，副主任医师，主要从事胃肠道疾病的基础与临床研究。

R73

A

1005-9202(2017)16-3998-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.041