沈利娟 王学红 马臻奇 马雪芹

(青海大学附属医院消化科，青海 西宁 810001)

·肿瘤·

胃腺癌组织趋化因子受体7和血管内皮生长因子-D的表达及临床意义

沈利娟 王学红 马臻奇 马雪芹

(青海大学附属医院消化科，青海 西宁 810001)

目的检测胃腺癌术后组织中趋化因子受体(CCR)7和血管内皮生长因子(VEGF)-D的表达，分析二者的临床意义及相关性。方法确诊为胃腺癌患者53例为观察组，距肿瘤边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织29例为对照组，均留取术后蜡块组织，应用免疫组化SP法检测两组CCR7和VEGF-D表达。结果观察组CCR7和VEGF-D表达阳性率明显高于对照组，观察组中CCR7和VEGF-D表达阳性率均与肿瘤脉管累犯和淋巴结转移密切相关。观察组CCR7表达与肿瘤增殖指数密切相关。相关分析显示观察组CCR7和VEGF-D呈正相关。结论CCR7和VEGF-D高表达对胃腺癌形成和进展有一定促进作用，CCR7对肿瘤的作用可能与VEGF-D介导的淋巴管生长因子生成有一定关联。

胃腺癌；趋化因子受体7；血管内皮生长因子-D；免疫组化

胃腺癌临床进展过程较快，其与淋巴道播散密切相关〔1〕，目前认为血管内皮生长因子(VEGF)-D是淋巴管生成的促进因子，可以通过与受体VEGFR3相结合，促进肿瘤间质中D2-40阳性的淋巴管新生〔2，3〕。趋化因子受体(CCR)7是表达于免疫细胞、内皮细胞细胞膜上的蛋白，其配体分布于外周免疫器官或组织，目前认为CCR7高表达与肿瘤进展有关，尤其是对转移的促进作用明显〔4〕，研究认为CCR7可能对脉管生成有一定作用〔5〕。本研究关注胃腺癌术后组织中CCR7和VEGF-D的表达，分析二者表达特征、临床病理意义及相关性。

1 资料与方法

1.1临床资料 2013年1月至2015年12月青海大学附属医院确诊为胃腺癌的患者53例为观察组，留取术后石蜡包埋的组织，其中男29例，女24例，年龄42～83(平均60.2)岁。纳入均符合世界卫生组织(WHO)中的诊断标准及分型(病理医师阅片复诊)。淋巴结转移19例，无淋巴结转移34例。上述患者距肿瘤边缘>5 cm的非肿瘤性胃黏膜组织29例为对照组，其中男15例，女14例，年龄45～78(平均58.7)岁。两组一般临床资料无明显差异，具有可比性。

1.2CCR7和VEGF-D蛋白的检测方法 术后留取的组织均应用40%的甲醛溶液固定24 h以上，由病理医师常规取材，脱水后进行石蜡包埋，切片。应用免疫组化方法检测CCR7和VEGF-D的表达，严格按实验步骤进行操作，采用二胺基联苯胺(DAB)显色，做好质量控制工作，减少人为误差。

1.3CCR7和VEGF-D表达的判读 CCR7和VEGF-D阳性表达的部位均是细胞质和(或)细胞膜，以呈现淡黄到棕黄色颗粒为阳性。观察组选择肿瘤细胞的分布密集区，对照组选择黏膜上皮的分布区进行观察，先在低倍镜下选择染色明显且典型的区域，然后在400倍下选择3个视野，计算阳性率，取平均值，以阳性率<10%定为阴性，≥10%定为阳性。

1.4统计学方法 采用SPSS17.0统计软件进行χ2检验和线性相关分析。

2 结 果

2.1两组CCR7和VEGF-D阳性率比较 观察组CCR7和VEGF-D阳性表达率明显高于对照组(P<0.001)。见表1。

表1 两组CCR7和VEGF-D表达阳性率比较〔n(%)〕

2.2CCR7和VEGF-D在观察组不同临床病理特征中的表达差异 观察组CCR7和VEGF-D表达阳性率与肿瘤脉管累犯、淋巴结转移密切相关；CCR7阳性表达与肿瘤增殖指数密切相关(P<0.05)。见表2。

表2 CCR7和VEGF-D在观察组不同临床病理特征中的阳性表达比较〔n(%)〕

2.3观察组CCR7和VEGF-D相关性 CCR7和VEGF-D呈正相关(r=0.42，P=0.042 5)。

3 讨 论

胃腺癌常见于中老年人，极少在30岁以下发病，但30岁以后呈迅速增长的趋势。胃腺癌形成时细胞的分化程度低，细胞异型大，转移率高〔6，7〕。研究显示胃腺癌间质可见明显的小淋巴管新生，这对肿瘤淋巴道播散提供了一个直接途径〔8〕。VEGF-D已经确定为VEGFs家族中的淋巴内皮细胞的生长因子之一，与VEGF-C的结构非常相似，其位于染色体XP22.31，全长50 kD，由7个外显子和6个内含子组成。VEGF-D对肿瘤间质中D2-40、淋巴管内皮透明质酸受体(LYVE)-1阳性的淋巴管生成有一定促进作用〔9，10〕。CCR7含有氨基酸378个，其基因定位于17q12-q21.2，研究显示CCR7可以有效促进上皮细胞迁移，同时能有效促进血管内皮细胞及平滑肌细胞迁移、增殖，提高管腔形成能力〔11，12〕。梁小芹等〔13〕发现CCR7和VEGF-D在乳腺癌中表达升高，且二者具有正相关性，认为CCR7和VEGF-D的表达水平在一定程度上提示了乳腺导管非典型增生向乳腺癌的转化潜能，其表达水平可以作为判断乳腺癌恶性生物学行为的重要指标。

本研究结果提示CCR7和VEGF-D高表达是促进肿瘤形成的重要因素〔14，15〕，即二者具有癌基因样的作用。本文提示二者高表达具有明显的促进肿瘤进展的作用。CCR7可以促进肿瘤细胞的增殖过程，这是CCR7与VEGF-D在胃腺癌中作用不一样的特征。CCR7的此种作用可能与其配体CCL19和CCL21的结合有关。胃癌是高增殖性肿瘤，因此CCR7能对肿瘤细胞繁殖有一定影响，这使肿瘤细胞增殖活跃，细胞数量增大，肿瘤体积明显增大，肿瘤生长加速，肿瘤呈进展状态。本文提示CCR7和VEGF-D具有明显的正向协同作用。CCR7对脉管的作用表现为对VEGF-D的调节上，此时淋巴管内皮细胞增殖，细胞繁殖，呈实性和出芽状增生，管腔形成明显，肿瘤细胞易于侵袭到脉管中，能形成脉管内癌栓和淋巴转移癌〔16，17〕。但是此种作用并不是单一作用形成的，与其受体VEGFR-3的协同作用有关，且这种作用也与VEGF-C的作用有关〔18〕。

1Mashino K，Sadanaga N，Yamaguchi H，etal.Expression of chemokine receptor CCR7 is associated with lymph node metastasis of gastric carcinoma.〔J〕.Cancer Res，2002；62(10)：2937-41.

2Deguchi K，Ichikawa D，Soga K，etal.Clinical significance of vascular endothelial growth factors C and D and chemokine receptor CCR7 in gastric cancer〔J〕.Anticancer Res，2010；30(6)：2361-6.

3Sugiura T，Inoue Y，Matsuki R，etal.VEGF-C and VEGF-D expression is correlated with lymphatic vessel density and lymph node metastasis in oral squamous cell carcinoma：implications for use as a prognostic marker.〔J〕.Int J Oncol，2009；34(34)：673-80.

4Wang J，Xi L，Hunt JL，etal.Expression pattern of chemokine receptor 6 (CCR6) and CCR7 in squamous cell carcinoma of the head and neck identifies a novel metastatic phenotype〔J〕.Cancer Res，2004；64(5)：1861-6.

5Wilson JL，Burchell J，Grimshaw MJ.Endothelins induce CCR7 expression by breast tumor cells via endothelin receptor A and hypoxia-inducible factor-1〔J〕.Cancer Res，2006；66(8)：4249-55.

6严 超，朱正纲，于颖彦，等.趋化因子受体CCR7在胃癌中的表达及其与淋巴结转移的关系〔J〕.中华胃肠外科杂志，2004；7(4)：315-8.

7赵金伟，王广义，孙 明.趋化因子受体CCR7在胃癌及转移淋巴结中的表达及其意义〔J〕.中国实验诊断学，2007；11(1)：46-8.

8Hanrahan V，Currie MJ，Gunningham SP，etal.The angiogenic switch for vascular endothelial growth factor (VEGF)-A，VEGF-B，VEGF-C，and VEGF-D in the adenoma-carcinoma sequence during colorectal cancer progression〔J〕.J Pathol，2003；200(2)：183-94.

9Liang X，Zhou H，Liu X，etal.Effect of local hyperthermia on lymphangiogenic factors VEGF-C and -D in a nude mouse xenograft model of tongue squamous cell carcinoma〔J〕.Oral Oncol，2010；46(2)：111-5.

10Szajewski M，Kruszewski WJ，Lakomy J，etal.VEGF-C and VEGF-D overexpression is more common in left-sided and well-differentiated colon adenocarcinoma〔J〕.Oncol Rep，2013；31(1)：125-30.

11Mburu YK，Abe K，Ferris LK，etal.Human β-defensin 3 promotes NF-κB-mediated CCR7 expression and anti-apoptotic signals in squamous cell carcinoma of the head and neck〔J〕.Carcinogenesis，2011；32(2)：168-74.

12Xia X，Liu K，Zhang H，etal.Correlation between CCR7 expression and lymph node metastatic potential of human tongue carcinoma〔J〕.Oral Dis，2015；21(1)：123-31.

13梁小芹，苏勤军.CCR7和VEGF-D蛋白在乳腺癌发生发展过程中的表达及意义〔J〕.中国普外基础与临床杂志，2016；36(6)：715-21.

14Al-Shareef H，Hiraoka SI，Tanaka N，etal.Use of NRP1，a novel biomarker，along with VEGF-C，VEGFR-3，CCR7 and SEMA3E，to predict lymph node metastasis in squamous cell carcinoma of the tongue〔J〕.Oncol Reports，2016；36(5)：2444-54.

15Lee J，Hwan KK，Kim H.Role of vascular endothelial growth factor-D (VEGF-D) on IL-6 expression in cerulein-stimulated pancreatic acinar cells〔J〕.Ann N Y Acad Sci，2007；1095(1)：129-33.

16吴坚美，姜金波.VEGF-C和VEGF-D在胃癌及相关淋巴结组织中表达和临床意义的研究〔J〕.中华肿瘤防治杂志，2007；14(8)：590-2.

17Song YM，Wang Z，Liu XY，etal.Erratum to：CCR7 and VEGF-C：molecular indicator of lymphatic metastatic recurrence in pN0 esophageal squamous cell carcinoma after ivor-lewis esophagectomy〔J〕?Ann Surg Oncol，2013；19(3)：3606-12.

18Shibata MA，Shibata E，Morimoto J，etal.Therapy with siRNA for VEGF-C but not for VEGF-D suppresses wide-spectrum organ metastasis in an immunocompetent xenograft model of metastatic mammary cancer〔J〕.Anticancer Res，2013；33(10)：4237-47.

〔2016-07-13修回〕

(编辑 苑云杰)

沈利娟(1980-)，女，主治医师，主要从事消化系统疾病研究。

R73

A

1005-9202(2017)16-3996-02；doi：10.3969/j.issn.1005-9202.2017.16.040