姬玉 朱建波 李梅 吴菲 杨兰 李锋(通讯作者)

832000石河子大学医学院病理系1100016首都医科大学附属北京朝阳医院病理科2

MiR-34a参与食管癌EMT的研究

姬玉1朱建波1李梅1吴菲1杨兰1李锋(通讯作者)2

832000石河子大学医学院病理系1100016首都医科大学附属北京朝阳医院病理科2

目的：探讨miR-34a在食管癌上皮间质转化中的作用。方法：向食管癌细胞EC109转染miR-34a模拟物，以qRT-PCR检测效率。以Western blot检测EMT相关蛋白E-cadherin和Vimentin的表达。结果：伴随miR-34a表达升高，E-cadherin相应升高，Vimentin则下降(P＜0.05)。结论：miR-34a可促进食管癌EMT的发生。

食管癌；miR-34a；EMT

目前，有关食管癌侵袭迁移的研究一直是热点和难点。而上皮间质转化(EMT)是恶性肿瘤侵袭迁移的关键因素之一[1]。本研究在EC109细胞中转染miR-34a模拟物，检测EMT相关蛋白E-cadherin、Vimentin的表达，报告如下。

资料与方法

在6孔板中铺匀EC109细胞，待达到70%融合时，用培养液稀释miR-34a模拟物后加到EC109细胞中，培养48 h后，提取RNA，用qRT-PCR法测miR-34a的表达情况，以鉴定miR-34a模拟物转染是否成功。以Western blot(WB)检测各组细胞E-cadherin、Vimentin蛋白的表达。

结 果

EC109细胞转染miR-34a模拟物后miR-34a的表达：转染模拟物组miR-34a的表达水平明显比对照组高，差异具有统计学意义(P＜0.05)，见图1。

转染miR-34a模拟物后EMT相关蛋白的表达：EC109细胞过表达miR-34a后上皮表型E-cadherin蛋白升高，间叶表型Vimentin表达降低，且分析其灰度值差异具有统计学意义(P＜0.05)，见图2。

图1 qRT-PCR检测转染模拟物后miR-34a的表达量

图2 WB检测转染模拟物后EMT相关蛋白变化

讨 论

MiR-34a在各组织中表达广泛，在神经母细胞瘤中具有抑癌作用。miR-34a基因位于人类1号染色体和宿主基因非编码区上，这个片段在众多肿瘤中都缺如，这是引起miR-34a低表达的原因之一。在食管癌组织中miR-34a的启动子区高甲基化也能够导致其低表达。有学者发现miR-34a表达增高可以促进肿瘤细胞凋亡，抑制其侵袭与迁移。

EMT是常见的一种生理现象，目前普遍认为肿瘤细胞发生EMT是浸润转移的重要途径。有研究认为，miR-34a与肿瘤细胞的EMT相关[2]。EMT过程中细胞在从上皮形态转换为间质形态时，一些标志物通常会发生改变，例如E-cadherin等上皮细胞表型标志物表达缺如；Vimentin等间质细胞表型标志物表达增加[3]。有研究证实miR-34a可以调节结肠癌细胞EMT的发生。在另一项研究中也证明了miR-34a能直接靶向下游分子从而抑制EMT的发生。但此类研究在食管癌中未见报道。因此本研究发现，随着miR-34a表达升高，E-cadherin表达显著升高，Vimentin表达随之下降。因此miR-34a在食管癌细胞中可能通过促进EMT从而利于EC109细胞侵袭转移。

综上所述，对食管癌中miR-34a与EMT的发生进行探讨，有助于对食管癌侵袭转移的发生机制了解得更深入，为食管癌转移的治疗指明新的靶点和方向。

[1]廉猛,房居高.上皮细胞间叶化的触发机制及肿瘤的侵袭转移[J].国际耳鼻咽喉头颈外科杂志,2010,13(4):212-216.

[2]庞翠,张菊,文超.EMT研究进展[J].现代肿瘤医学,2016,11(2):2484-2487.

[3]刘剑,王峰,何炜.钠氢交换蛋白1基因在体外对食管癌KYSE-70细胞增殖和侵袭作用的影响[J].肿瘤,2013,12(2):126-131.

MiR-34a involvement in esophageal cancer EMT

Ji Yu1,Zhu Jianbo1,Li Mei1,Wu Fei1,Yang Lan1,Li Feng(Corresponding author)2
Department of Pathology,Medical College f Shihezi University 8320001Department of Pathology,Beijing Chaoyang Hospital Affiliated to Capital Medical University 1000162

Objective:To investigate the role of miR-34a in epithelial mesenchymal transition of esophageal carcinoma.Methods:MiR-34a analog was transfected into esophageal cancer cell line EC109,and the efficiency of qRT-PCR detection was detected.Western and blot were used to detect the expression of EMT related proteins E-cadherin and Vimentin.Results:With the increase of miR-34a expression,E-cadherin increased and Vimentin decreased(P＜0.05).Conclusion:MiR-34a can promote the occurrence of EMT in esophageal carcinoma.

Esophagus cancer;MiR-34a;EMT

10.3969/j.issn.1007-614x.2017.23.1

科研项目国家自然科学基金编号：81260301

Research projectNational Natural Science Foundation of China No:81260301