高金玉， 郭慧琴， 曹 路， 韩 冰,2*

(1.内蒙古农业大学生命科学学院， 内蒙古 呼和浩特 010018； 2.中国农业科学院草原研究所， 内蒙古 呼和浩特 010018)

实时荧光定量PCR(Real-time quantitative PCR,qRT-PCR)是一种基于普通PCR定性技术发展而来的新型的核酸定量技术，具有定量准确、重现性高、灵敏度高和高通量等特点，已被广泛应用于微生物检测、单个核酸多态性分析和基因表达研究。在基因表达分析过程中，结果时常会受到不同变量的影响，如起始RNA的质量和数量、反转录合成[1]。在qRT-PCR试验中，为了使结果可信，需要筛选表达稳定的内参基因作为标准[2-3]。在基因定量表达的研究中，通常选用看家基因(House-keeping gene)作为内参基因，因为看家基因是全部细胞中均要表达的一类基因，其产物对于维持细胞各种基本生命活动是必需的，比如常用的糖酵解酶系基因、微管蛋白基因和核糖体蛋白基因等。一般认为看家基因的表达只受机体RNA聚合酶或启动子相互作用的影响，并不受其他机制调节，看家基因的表达受环境因素的影响较小。但随着研究的深入，发现看家基因在不同组织部位或者不同处理下的表达量并不稳定，导致试验结果的准确性降低，甚至发生错误[4]。关波[5]曾经发现18srRNA在不同组织细胞中的表达量是不同的，在细胞有丝分裂期间，其表达量近乎为零。这些结果使得人们在直接选择18srRNA、TUB等常规的看家基因作为内参基因时产生了怀疑[6]，因此对最适内参基因的筛选成为了对基因表达进行定量研究前所必需的工作。……