李宜桦，邰艳妮，吴献，林青青，戴成球，谢瑞华，徐伟，褚克丹

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建承天药业有限公司，福建南平353000）

闽产泽泻收获期不同部位萜类成分含量比较

李宜桦1，邰艳妮1，吴献1，林青青1，戴成球1，谢瑞华2，徐伟1，褚克丹1

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建承天药业有限公司，福建南平353000）

目的考察收获期泽泻不同部位萜类成分含量并进行含量比较。方法以23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B为指标，采用高效液相色谱法Agilent Technologies 1260系统，Ultimate XB-C18色谱柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相乙腈∶水（75∶25），检测波长208 nm，流速1.0 mL·min-1，柱温30℃。结果收获期泽泻23-乙酰泽泻醇B的含量为芽＞块茎＞茎＞块茎茎皮＞须根＞叶，而泽泻醇B的含量为块茎＞芽＞块茎茎皮＞茎，须根和叶中未检出。结论收获期泽泻不同部位在两种萜类成分含量存有差异，其中块茎和芽中23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B含量最高，其含量显著高于其它部位，收获期枯萎丢弃的茎和茎皮中也分布有23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B，说明其可能也具有一定的药用价值，具有开发利用的潜在价值。

泽泻；23-乙酰泽泻醇B；泽泻醇B；含量测定

泽泻（Alismatis Rhizoma）来源于泽泻科泽泻属植物东方泽泻Alisma orientale（Sam.）Juzep.，其性甘、淡、寒，具有泄热、利水渗湿等功效。临床上经过组方，常用于小便不利、痰饮眩晕、高脂血症等［1］，现代药理学研究表明泽泻有降血脂、降糖、抗脂肪肝、抗动脉粥样硬化、抗肿瘤等作用［2-4］。现代化学研究表明泽泻化学成分以三萜类为主［5］，药理活性研究表明三萜类成分是泽泻最主要的药效物质基础［6］，而活性报道比较多的为23-乙酰泽泻醇B、泽泻醇B、24-乙酰泽泻醇A、泽泻醇A。另据文献Zhao［7］、赵万里等［8］泽泻三萜多成分的定性定量研究表明泽泻中23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B是泽泻的最主要有效成分，并且23-乙酰泽泻醇B也是中国药典中泽泻的指标性成分，因此23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B是常常作为评价泽泻质量的主要指标［9-11］。

泽泻自古以来药用部位均为块茎。冬季茎叶开始枯萎时采挖地下块茎部分，洗净，干燥，以除去须根和茎皮后的块茎入药。收获期采收时，泽泻地上部分没有利用，除去的须根和茎皮中是否有泽泻的有效成分，鲜有研究。因此为了评价收获期建泽泻不同部位的活性成分含量，本文采用HPLC法对采收期建泽泻须根、块茎茎皮、茎、叶、芽及块茎6个部位中的23-乙酰泽泻醇B及泽泻醇B含量进行测定研究，为综合利用泽泻资源提供实验依据。

1 仪器与试药

Agilent Technologies 1260型高效液相色谱仪（美国Agilent公司）；Agilent Chem Station工作站；CPA225D型十万分之一分析天平（德国Sartorius公司）；KQ－500E台式超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；Milli-Q超纯水仪（美国Milli-pore公司）；乙腈为色谱纯（德国Merck公司）；水为超纯水，其它试剂为分析纯。23-乙酰泽泻醇B对照品（中国食品药品检定研究院，批号：111846-201504）；泽泻醇B对照品（上海源叶生物科技有限公司，批号：18649-93-9）。

按照GAP生产规范，收获期泽泻采自福建建瓯吉阳泽泻GAP基地（2017年1月16日，北纬27° 7′，东经118°7′，福建承天药业有限公司），在种植基地内随机采集6个位置点，每个点不少于6株。所有样品汇总后，地上部分分为茎和叶，地下部位收集最外层块茎茎皮、块茎须根、干净块茎及块茎的顶芽，经福建中医药大学药用植物实验室范世明高级实验师鉴定为泽泻科泽泻属植物东方泽泻（Alisma orientale（Sam.）Juzep.），样本存放于福建中医药大学药学院药用植物学标本室。收获期泽泻各个部位经过干燥，粉碎，过65目筛，备用。

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备取泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B对照品适量，精密称定，加入乙腈分别制备含60 μg·mL-1、79.6 μg·mL-1的单一对照品溶液。

2.2 供试品溶液制备精密称取收获期泽泻不同部位（茎、叶、块茎茎皮、须根、块茎及芽）粉末各0.5 g，置具塞锥形瓶中，精密加入乙腈25 mL，密塞，超声处理30 min（功率250 W，频率50 kHz），放冷，称定超声处理前后两次的重量，用乙腈补足超声提取减失的重量；摇匀，0.45 μm滤膜滤过，取续滤液，即得测试样品。

2.3 色谱条件采用Ultimate XB-C18（4.6 mm× 150 mm，5 μm）色谱柱；以乙腈-水（75∶25）为流动相，柱温：30℃，流速：1.0 mL·min-1，进样量：10 μL。该色谱条件下色谱峰分离良好，见图1～图3。

图1 泽泻醇B对照品HPLC色谱图

图2 23-乙酰泽泻醇B对照品HPLC色谱图

图3 泽泻样品HPLC色谱图

2.4 方法学考察

2.4.1 线性与范围分别精密吸取泽泻醇B和 23-乙酰泽泻醇B对照品溶液，用乙腈稀释制备泽泻醇B质量浓度为0.60、3、6、15、30、60 μg·mL-1，23-乙酰泽泻醇B质量浓度为0.796、3.98、7.96、19.9、39.8、79.6 μg·mL-1的6种不同质量浓度对照品溶液，按“2.3”色谱条件下进行分析，分别记录检测峰面积，以峰面积（Y）对待测成分质量浓度（X，μg·mL-1）进行线性回归，得泽泻醇B的线性方程为：Y＝78.43X＋19.75（r＝0.999 4），23-乙酰泽泻醇B的线性方程为：Y＝78.29X＋15.45（r＝0.999 7）。结果表明在考察的线性范围内，待测成分峰面积和质量浓度线性关系良好。

2.4.2 精密度实验精密吸取泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B对照品溶液，在“2.3项”色谱条件下进行分析，连续检测6次，记录泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的峰面积，计算两者RSD分别为0.72%和0.47%，表明实验精密度良好。

2.4.3 稳定性实验取泽泻块茎供试品0.5 g，按照“2.2”项下制备供试品溶液，分别于1、2、4、8、12、24 h在“2.3项”色谱条件下对样品进行分析，记录泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的峰面积，计算两者RSD分别为1.02%和1.38%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.4.4 重复性实验取同批次泽泻块茎供试品0.5 g，按照“2.2”项下制备供试品溶液，平行操作6份，分别于“2.3项”色谱条件下对样品进行分析，记录泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的峰面积，计算两者含量，两者含量的RSD分别为2.14%和2.05%，表明实验重复性良好。

2.4.5 回收率实验精密称取重复性实验批次泽泻样品0.25 g，6份，根据含量加入近似1∶1的泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B对照品，按照“2.2”项下制备供试品溶液，分别于“2.3项”色谱条件下对样品进行分析，记录泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的峰面积，计算回收率及RSD，结果见表1。表1表明检测方法回收率实验符合分析要求。

表1 加样回收实验结果（n＝6）

2.5 样品含量测定精密称取收获期泽泻块茎茎皮、须根、茎、叶、芽及块茎各0.5 g，按“2.2项”下方法制备供试品溶液，每个部位制备3份供试品液，分别于“2.3项”色谱条件下对样品进行分析，记录泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的峰面积，计算其含量，见表2。

表2 各样品中2种成分的平均含量（n＝3，mg／g）

3 讨论

本研究通过对泽泻萜类成分文献分析，最终选择活性明显、含量较高的泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B作为检测指标；色谱条件经过考察，发现Ultimate色谱柱分离效果最佳，乙腈-水作为流动相优于甲醇-水的分离效果；采用光电二极管阵列检测器，对泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B对照品溶液进行全波长扫描（190～400 nm），表明泽泻醇B、23-乙酰泽泻醇B在扫描波长范围内为末端吸收，故采用208 nm波长作为检测波长。

本次的测定结果显示：收获期泽泻不同部位中泽泻醇B含量在0.065～0.531 mg／g（其中须根和叶中含量最低且须根和叶中的泽泻醇B含量无法检出），而23-乙酰泽泻醇B含量则在0.089～2.781 mg／g，不同部位23-乙酰泽泻醇B和泽泻醇B的含量存在显著性差异，泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B含量在块茎和芽中高，分别达到0.531、1.578 mg／g与0.459、2.781 mg／g，远高于须根、茎皮、茎和叶。收获期泽泻23-乙酰泽泻醇B的含量高低依次为芽＞块茎＞茎＞块茎茎皮＞须根＞叶，而泽泻醇B的含量为块茎＞芽＞块茎茎皮＞茎，须根和叶中未检出。

查阅文献，目前对于收获期泽泻的不同部位萜类成分含量比较鲜有研究报道，但是对于泽泻采收期块茎的萜类活性成分的积累已有研究：1998年文红梅等［12］研究川泽泻最佳采收期后认为：萜类成分在1-3月基本一致，而4月以后含量升高；2007年刘红昌等［13-14］对不同育苗期、移栽期和采收期川泽泻萜类成分积累、质量变化进行细致研究后认为：泽泻最佳采收期为12月下旬；而蒋轶伦等［15］采用指纹图谱和萜类成分含量测定相结合的方法，考察了闽产GAP基地建泽泻移栽之后80～144 d共计10个采样点的动态变化，结果表明指纹图谱在泽泻移栽122～144 d，即1月初到1月末的时候，指纹图谱趋于稳定，从两种萜类成分含量积累来看，同样也是122～144 d，即1月初到1月末的时候含量积累达到最高值。因此，根据文献的调研结果及GAP基地的生产规范，本研究取地上部分及不同部位研究的时间选择吉阳GAP采收规范的采收期时间（1月中旬），采样时间满足收获期样品的实验要求，同时为了使研究样品的具有足够代表性，本实验样品取自种植基地示范田的6个随机位置，每个位置不少于6株，所有收集的样品进行汇总取样测定，能够反映本年度基地收获期泽泻的不同部位萜类成分分布情况。

根据实验测定结果，对于收获期泽泻的茎皮和茎，虽然两者泽泻醇B和23-乙酰泽泻醇B的含量偏少，但是这两部分的生物量均较多，因此也可能具有一定的药用价值，可以作为泽泻萜类开发利用或弃物再利用的潜在部位。

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R284.2

A

1000-338X（2017）04-0057-03

2017-07-05

国家中医药管理局项目（ZYBZH-Y-FJ-09）；福建省大学生创新创业训练项目（2017）

李宜桦（1993—），女，2015级中药学专业硕士研究生，主要从事中药质量控制研究。

褚克丹（1963—），女，教授。E-mail：chukd5917@163.com