刘丽清，翁霞萍，郑文伟，李西海，刘献祥，叶蕻芝

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350122；3.福州市食品药品检验所，福建福州350007；4.中国人民解放军第九五医院，福建莆田351100）

HPLC测定独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量

刘丽清1，3，翁霞萍1，4，郑文伟1，李西海2，刘献祥2，叶蕻芝2

（1.福建中医药大学药学院，福建福州350122；2.福建中医药大学中西医结合研究院，福建福州350122；3.福州市食品药品检验所，福建福州350007；4.中国人民解放军第九五医院，福建莆田351100）

目的建立独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的HPLC分析方法。方法色谱柱：UltimateTMXB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相：A（水）∶B（甲醇）＝0～10 min，60∶40；10～12 min，20∶80；12～22 min，20∶8；流速：1.0 mL／min；进样体积：10 μL；紫外检测器波长：230 nm；柱温：30℃。结果HPLC检测独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪及蛇床子素的含量分别为0.100 7%、0.003 1%、0.015 6%。结论HPLC分析方法可用于独活寄生汤水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量测定，为独活寄生汤水提物质量控制提供参考。

独活寄生汤；高效液相色谱法；芍药苷；盐酸川芎嗪；蛇床子素

独活寄生汤来自唐代·孙思邈《备急千金要方》，由独活、桑寄生、茯苓、细辛、肉桂心、防风、川芎、当归、牛膝、秦艽、党参、白芍、熟地黄、杜仲、甘草15味药物组成［1］。现代药理研究证实：独活寄生汤具有镇痛、抗炎、扩张血管、改善循环和调节免疫功能等作用［2-4］。前期研究表明：独活寄生汤能有效抑制炎症细胞因子等，有效缓解骨关节炎的临床症状及体征［5-8］。

独活为祛风除湿散寒药，蛇床子素为其主要成分之一［9］；川芎为益气活血药，其中川芎嗪是其重要药效成分之一［10］；白芍属补肾柔肝药，芍药苷是其主要成分之一［11］。本文用芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量作为独活寄生汤复方汤剂水提物的质量监控。

1 仪器与试剂

1.1 仪器高效液相色谱仪（Agilent 1200 Series）；色谱柱UltimateTMXB-C18柱［月旭科技（上海）股份有限公司］；AL-240型分析天平［梅特勒-托利多国际贸易（上海）有限公司］；KQ-500E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）。

1.2 试药独活寄生汤水提物，自制；芍药苷（中国药品生物制品检定所，批号：110736-201035）；盐酸川芎嗪（中国药品生物制品检定所，批号：110817-200305）；蛇床子素（中国药品生物制品检定所，批号：0822-200204）；无水甲醇（国药集团化药试剂有限公司，HPLC级）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件色谱柱：UltimateTMXB-C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；A（水）∶B（甲醇）＝0～10 min，60∶40；10～12 min，20∶80；12～22 min，20∶80；流速：1.0 mL／min；进样体积：10 μL；紫外检测器波长：230 nm；柱温：30℃。在此色谱条件下，混合对照品HPLC图见图1，供试品HPLC图见图2。

图1 混合对照品HPLC高效液相色谱图

图2 独活寄生汤水提物HPLC高效液相色谱图

2.2 单体对照品溶液的制备精密称取芍药苷、盐酸川芎嗪及蛇床子素对照品一定量，置10 mL瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，分别制成一定浓度的芍药苷、川芎嗪及对蛇床子素对照品溶液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.3 混合对照品溶液的制备精密称取芍药苷、盐酸川芎嗪及蛇床子素对照品一定量，置同一10mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，最后配成浓度分别为37、35、52 μg／mL的混合对照品溶液，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得。

2.4 供试品溶液的制备精密量取上述水提物2 mL，置10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，过0.45 μm微孔滤膜，取续滤液，即得供试品溶液。

2.5 线性关系考察分别精密吸取混合对照品溶液10、8、6、5、4、3、2、1 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图。以峰面积（Y）为纵坐标，进样量（X）为横坐标，进行回归分析，得到：

芍药苷的回归方程：Y＝1410.5X－1.5193r＝0.999 59

盐酸川芎嗪的回归方程：Y＝2336.1X－17.825 r＝0.999 79

蛇床子素的回归方程：Y＝2780.1X＋12.943 r＝0.999 95

芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素性范围分别为：0.347～18.612、0.347～20.328、0.518～25.833 μg。

2.6 精密度试验混合对照品溶液按上述色谱条件，连续进样6次，测得峰面积的RSD值分别为芍药苷1.07%，盐酸川芎嗪1.12%，蛇床子素1.27%。

2.7 重复性试验平行制备供试品溶液6份，按上述色谱条件测定，记录峰面积，计算芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量平均值分别为950.30、208.12、82.68 μg／mL，RSD值分别为1.07%、1.59%、1.91%。

2.8 稳定性试验取1份样品，每隔2 h测定1次，共测6次，测得峰面积的RSD值分别为芍药苷1.88%，盐酸川芎嗪0.59%，蛇床子素1.67%，表明独活寄生汤水提物在12 h内稳定。

2.9 加样回收试验精密量取上述水提物2 mL，分别精密加入质量浓度为0.2 mg／mL芍药苷对照品溶液、0.2 mg／mL蛇床子素对照品溶液和0.2 mg／mL川芎嗪对照品溶液各2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液测定，平行处理6份，计算加样回收率。结果见表1。

表1 加样回收试验回收率结果

2.10 独活寄生汤水提物测定根据最优工艺条件，提取3批独活寄生汤水提物，检测其中芍药苷、盐酸川芎嗪及蛇床子素的含量，求平均值。最终测得独活寄生汤水提物中芍药苷含量为0.100 7%，盐酸川芎嗪含量为0.003 1%，蛇床子素含量为0.015 6%。

3 讨论

目前，HPLC分析法广泛运用于中药复方中主要成分的测定［12］，具有选择性好、提取完全、精密度良好及回收率符合要求等优点，且整个实验过程可操作性强，能客观地控制本品的质量，故选HPLC分析法作为独活寄生汤水提物质量控制的方法。

由于独活寄生汤含有15味药材，成分复杂，所以从该方的三个主要功效：祛风除湿、益气活血及补肾柔肝入手，分别选取其中对应的3味主要药材独活、川芎及白芍进行研究，选用其主要成分芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素三者作为独活寄生汤水提物质量控制的考察目标。

实验中发现：流动相比例的微量调整即能使分离有很大的改变，经过试验确定最佳条件为流动相A（水）∶B（甲醇）＝0～10 min，60∶40；10～12 min，20∶80；12～22 min，20∶80，流速：1.0 mL／min；进样体积：10 μL；紫外检测器波长：230 nm；柱温：30℃。在此条件下，可以使复方汤剂水提物中芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素三者得到很好地分离，并得到各自具体的含量。

本实验通过测定芍药苷、盐酸川芎嗪、蛇床子素的含量，建立独活寄生汤水提物的HPLC分析方法，为独活寄生汤水提物质量控制提供参考。

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R284.2

A

1000-338X（2017）04-0043-02

2017-06-02

国家自然科学基金资助项目（81373818）

刘丽清（1986—），女，主管药师，主要从事药品检验工作。

叶蕻芝（1968—），女，研究员。E-mail：yelin0930@163.com