葛权虎，吴向未,2，程文哲，万龙飞，王小义，赵伯文

(1 石河子大学医学院第一附属医院，新疆石河子832008；2 石河子大学医学院)

小鼠骨髓间充质干细胞对血管内皮祖细胞分化潜能的影响

葛权虎1，吴向未1,2，程文哲1，万龙飞1，王小义1，赵伯文1

(1 石河子大学医学院第一附属医院，新疆石河子832008；2 石河子大学医学院)

目的 探讨小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)对血管内皮祖细胞(EPCs)向内皮细胞(ECs)分化的影响。方法 分离、培养及扩增小鼠骨髓MSCs和EPCs。取5×105个EPCs接种于含5% FBS的EBM-2培养液，置于Transwel下室(对照组)；取5×105个EPCs接种于含5% FBS的EBM-2+20 ng/mL血管内皮细胞生长因子(VEGF)的培养液，置于Transwell下室(VEGF组)；取5×105个MSCs接种于Transwell insert膜上、5×105个EPCs接种于Transwell下室(共培养组)，培养液同对照组。培养48 h，收集各组下室EPCs，采用RT-PCR法检测内皮型一氧化氮合成酶(eNOS)和激酶插入结构域受体(KDR)mRNA表达；ELISA法检测各组细胞培养液上清VEGF含量。提取MSC条件培养基(MSCCM)及LG-DMEM基础培养基，ELISA法检测VEGF含量。取传3代EPCs，分别用LG-DMEM、MSCCM、MSCCM+IgG、MSCCM+VEGF抗体的培养液培养48 h(分别设为LG-DMEM组、MSCCM组、MSCCM+IgG组、MSCCM+VEGF抗体组)，收集细胞，采用RT-PCR法检测各组eNOS、KDR mRNA表达。结果 共培养组eNOS、KDR mRNA相对表达量明显高于对照组和VEGF组(P<0.05或<0.01)；共培养组、VEGF组培养液上清VEGF含量均明显高于对照组(P均<0.01)。MSCCM中VEGF含量较LG-DMEM基础培养基明显增加(P<0.01)。MSCCM组和MSCCM+IgG组eNOS、KDR mRNA相对表达量较LG-DMEM组、MSCCM+VEGF抗体组均明显增加(P均<0.01)。结论 小鼠骨髓MSCs可能通过旁分泌VEGF促进血管EPCs向ECs分化。

骨髓间充质干细胞；血管内皮祖细胞；内皮细胞；细胞分化；血管内皮细胞生长因子

近年来，以干细胞为主的细胞疗法在缺血性疾病的治疗方面取得了显著进展[1～3]。内皮祖细胞(EPCs)主要存在于骨髓，在某些情况下可被动员到外周血，分化为内皮细胞(ECs)并归巢到靶组织，参与血管生成和组织修复[4]。间充质干细胞(MSCs)主要来源于骨髓的非造血成体干细胞，具有自我更新和多向分化潜能[5，6]。……