黄玲燕

白藜芦醇增强乳腺癌细胞对γδT细胞的敏感性及其机制研究

黄玲燕

目的探讨γδT细胞对乳腺癌细胞的杀伤活性，观察白藜芦醇增强γδ T细胞的抗肿瘤活性。方法体外扩增培养人γδT细胞并用流式细胞术进行鉴定。实验分为对照组、白藜芦醇组、γδT细胞组、白藜芦醇+γδT细胞组及白藜芦醇+γδT细胞+c-FLIP质粒组。LDH释放实验检测γδT细胞对MDA-MB-231乳腺癌细胞的杀伤活性；western blot实验检测白藜芦醇及γδT细胞处理后MDA-MB-231细胞的细胞Fas-相关性死亡结构域样白介素-1β转换酶抑制蛋白（c-FLIP）的表达水平、活化半胱天冬酶（caspase）8、caspase 9、caspase 3的活化和细胞色素c的释放。结果流式细胞实验结果显示在体外用BrHPP和IL-2培养14天的人单个核细胞、CD3和γδTCR，确定这些定向培养的效应细胞为γδT细胞。LDH释放实验显示γδT细胞+白藜芦醇组对MDA-MB-231的杀伤活性为（68.2±7.1）%，显著高于γδT细胞组的（21.4±3.2）%（P<0.05）和白藜芦醇+γδT细胞+c-FLIP质粒组的（27.9±3.6）%（P<0.05）。Western blot实验结果显示白藜芦醇处理能显著降低MDAMB-231细胞中c-FLIP蛋白的表达，γδT细胞+白藜芦醇组MDA-MB-231的活化caspase 8及细胞色素c的释放均显著高于γδT细胞组和白藜芦醇+γδT细胞+c-FLIP质粒组。结论白藜芦醇下调乳腺癌细胞c-FLIP的表达，提高乳腺癌细胞对γδT细胞的敏感性。

乳腺癌；MDA-MB-231细胞；γδ T细胞；白藜芦醇；c-FLIP基因

乳腺癌是女性群体中发病率最高的恶性肿瘤，而且患者的5年生存率较低，严重危害女性健康[1]。手术是目前治疗乳腺癌最有效的手段，化疗或免疫治疗是术后不可缺少的巩固治疗手段[2]。近期的研究已经将一些免疫效应细胞作为药物进行临床试验，用于肿瘤的治疗[3]。γδ T细胞是T细胞的一个亚群，其表面的T细胞受体（TCR）由γδ肽链组成，能直接杀伤肿瘤细胞而不需要通过MHC分子进行抗原提呈。然而肿瘤细胞对γδ T细胞单独治疗的敏感性较低[4]，因此辅以其它药物提高乳腺癌细胞对γδ T细胞的敏感性是提高其疗效的有效方法。另外，γδ T细胞能直接杀伤肿瘤细胞，导致肿瘤发生裂解，释放其中的乳酸脱氢酶（LDH），因此检测培养体系中的LDH活性可用于测定γδ T细胞对肿瘤细胞的杀伤活性[5]。……