李美佳，张维娜，渠开攀，王 冰

1.青岛大学附属医院烧伤整形外科，山东 青岛 266000；2.青岛大学医学院免疫教研室，山东 青岛 266000

跨膜接头蛋白CBP对皮肤鳞癌细胞A431生长增殖的负调控作用研究

李美佳1，张维娜1，渠开攀1，王 冰2

1.青岛大学附属医院烧伤整形外科，山东 青岛 266000；2.青岛大学医学院免疫教研室，山东 青岛 266000

背景与目的：跨膜接头蛋白(Csk-binding protein，CBP)是新发现的Src家族成员，与多种肿瘤的发生有关。该研究旨在观察CBP基因过表达对皮肤鳞癌细胞系A431增殖及细胞凋亡的影响，探讨其相关的分子机制。方法：构建CBP-增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein，EGFP)融合蛋白的慢病毒过表达载体，采用反转录病毒转染的方法建立CBP过表达的A431细胞株。实验分为亲本细胞组(未进行基因转染的A431细胞)、对照组(A431细胞转染仅含EGFP阴性对照病毒)和实验组(A431细胞转染CBP-EGFP病毒)。在激光共聚焦显微镜下观察细胞转染率，验证转染成功与否；CCK-8法检测CBP过表达对A431细胞增殖能力的影响，并采用流式细胞术( flow cytometry，FCM)检测对细胞凋亡的影响；实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative polymerase chain reaction，RTFQ-PCR)和蛋白［质］印迹法(Western blot)检测Lck、Csk和Fyn三种上游信号转导分子分别在mRNA和蛋白中的表达水平变化。结果：建立了稳定过表达CBP的A431细胞株；CCK-8法结果提示，CBP过表达明显抑制细胞生长，第2～6天的组间差异有统计学意义(P＜0.05)；FCM检测显示，实验组细胞凋亡率显著增加，与亲本细胞组及对照组相比差异有统计学意义(P＜0.001)；RTFQ-PCR结果显示，实验组A431细胞Lck mRNA的相对表达水平显著下调(P＜0.001)，实验组细胞Csk和Fyn mRNA的表达分别约为亲本细胞组的1.6倍和3.8倍，表达显著上调(P＜0.001)；……