邹 斌，周学亮#，詹宇亮，陈紫晴，赖松青，吴 霞，刘季春△

(南昌大学第一附属医院:1.心胸外科;2.心血管内科，南昌 330006)

慢病毒载体介导HIF1α稳定表达A549细胞系构建*

邹 斌1，周学亮1#，詹宇亮2，陈紫晴1，赖松青1，吴 霞1，刘季春1△

(南昌大学第一附属医院:1.心胸外科;2.心血管内科，南昌 330006)

目的 利用慢病毒载体系统构建稳定表达HIF1α的A549细胞系。方法 以NCBI人HIF1α基因编码序列为模板，设计并合成引物，PCR法扩增HIF1α。酶切回收的HIF1α片段与制备的慢病毒载体HBLV-RFP-Puro重组反应。PCR和基因测序鉴定重组质粒。重组质粒和辅助质粒共转染293T细胞。包装好的病毒经过滤、浓缩后，利用稀释计数法测定病毒滴度。制备好的慢病毒感染A549细胞，采用药物筛选稳定转染细胞系。荧光显微镜及Western blot检测观察转染及筛选效果。结果 PCR扩增HIF1α片段经鉴定成功，重组质粒经PCR、基因测序鉴定构建成功。成功包装获得高滴度LV-HIF1α。LV-HIF1α感染A549细胞后经药物筛选，荧光显微镜下细胞带有红色荧光，Western blot结果显示LV-HIF1α组HIF1α的表达水平明显高于对照组。结论 慢病毒载体介导HIF1α稳定表达的A549细胞系构建成功。

HIF1α；慢病毒载体；稳定表达；A549

肺癌是全球最常见的恶性肿瘤之一，其导致的死亡人数居各类恶性肿瘤之首[1]。在过去的研究中，尽管在肿瘤生物学、临床研究等方面取得了不断的进展，但肺癌的5年生存率仅提高了5%[2]。基于分子分型的个体化治疗及靶向治疗是肺癌治疗的发展方向之一。因此，肺癌的生物学研究聚焦于寻找关键驱动基因或信号通路。由于肿瘤缺氧激活的缺氧反应信号通路对肿瘤生物学行为(血管生成、侵袭、转移等)产生重要影响[3-4]。……