朱园飞，李改云，常豪，鱼康康，高月求，邓强

1. 上海中医药大学附属曙光医院细胞免疫实验室，上海 201203； 2. 中国科学院上海巴斯德研究所分子病毒与免疫重点实验室，上海 200032

·论著·

应用微环DNA技术体外诱导和制备重组的乙型肝炎病毒共价闭合环状DNA

朱园飞1, 2，李改云2，常豪2，鱼康康2，高月求1，邓强1, 2

1. 上海中医药大学附属曙光医院细胞免疫实验室，上海 201203； 2. 中国科学院上海巴斯德研究所分子病毒与免疫重点实验室，上海 200032

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA，cccDNA)是病毒慢性感染的分子基础。本课题组前期研究通过Cre/loxP介导的位点特异性DNA重组策略，在细胞核内由前体质粒诱导重组cccDNA(rcccDNAloxP)产生，首次建立了HBV cccDNA的体外培养细胞和小鼠实验模型。本研究基于大肠埃希菌ZYCY10P3S2T PhiC31重组酶诱导表达系统，建立了一种体外诱导HBV rcccDNA(rcccDNAattR)微环产生和纯化的策略。纯化的rcccDNAattR微环具有超螺旋结构，细胞培养实验证实其能支持功能性的HBV复制和抗原表达。与普通的线性HBV复制子编码质粒相比，rcccDNAattR尾静脉高压注射小鼠模型能诱导显著延长的病毒抗原血症。因此，本研究在原核表达系统和实验小鼠水平提供了一种更为简化的HBV cccDNA实验模型系统，并再次显示rcccDNA具有显著的稳定性，能作为一种基本策略在小鼠模型中诱导病毒持续感染。

微环DNA技术；PhiC31；位点特异性重组；乙型肝炎病毒；共价闭合环状DNA

乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)成熟粒子中含有约3.2 kb的松弛环状DNA基因组(relaxed circular DNA，rcDNA)。在病毒感染的肝细胞核内，rcDNA修复为共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA, cccDNA)，是HBV 转录复制的原始模板[1]。……