丁 毅，杨 欣

糖尿病颈动脉粥样硬化患者内皮祖细胞变化特点

丁 毅1，杨 欣2

（1.桂林市人民医院内分泌科，广西桂林 541002；2.桂林市人民医院重症科，广西桂林 541002）

目的 探讨2型糖尿病与糖尿病颈动脉粥样硬化患者内皮祖细胞（EPCs）的数量变化及特点。方法 32例健康成年人为对照组，104例确诊糖尿病患者，将其通过多普勒超声测量颈动脉分为单纯糖尿病组（DM）56例和糖尿病粥样硬化组48例，采集受试者血压、血糖、胰岛素、甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、极低密度脂蛋白（VLDL-C）等临床指标，采集糖尿病粥样硬化组的颈动脉内膜中层厚度（IMT），并测试三组的内皮祖细胞（EPCs）进行分析对比。结果 糖尿病颈动脉硬化组的EPCs、HOMA胰岛素抵抗指数均高于DM组和对照组，且EPCs与IMT、HOMA胰岛素抵抗负相关关系。结论 糖尿病早期即对内皮功能有所影响，胰岛素抵抗是影响内皮功能的重要因素。

糖尿病；颈动脉粥样硬化；内皮祖细胞

糖尿病所导致的心脑血管疾病严重威胁着人类健康。颈动脉粥样硬化反应了全身动脉硬化负荷，预见了心脑血管疾病发生。检测内皮细胞功能对判断动脉粥样硬化发展和预后均有重要意义。内皮祖细胞不仅参与了胚胎期的血管发育，也在动脉粥样硬化中有重要影响。本研究就糖尿病颈动脉粥样硬化患者的内皮祖细胞进行探讨。

1 资料与方法

1.1 一般资料

选择桂林市人民医院2012年1月—2013年12月期间的体检中心的健康正常人和内分泌科住院的糖尿病患者，应用多普勒超声测量糖尿病患者的颈动脉，将其分为单纯糖尿病组和糖尿病粥样硬化组，将健康正常人作为对照组。其中对照组共32例，其中男性16例，女性16例，平均年龄（42.3±10.8）岁，单纯糖尿病组（DM）共56例，男性35例，女性21例，平均年龄（64.8±11.4）岁，糖尿病粥样硬化组48例，男性27例，女性21例，平均年龄（66.6±7.71）岁。对所有研究对象的年龄、性别、血压、体重指数（BMI）进行详细询问和采集，并在次日清晨予患者抽血，应用全自动生化分析仪测定，检测糖化血红蛋白（HbA1c）、空腹血糖（FPG）、餐后两小时血糖（2H PPG）、甘油三脂（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL-C）、低密度脂蛋白（LDL-C）、极低密度脂蛋白（VLDL-C），空腹胰岛素（FINs），餐后2 h胰岛素（INS）指标，BMI=体重/身高2；HMOA胰岛素抵抗指数（HOMAIR）=（FBG×FINS）/22.5。

1.2 颈动脉测量

使用仪器512型超声诊断仪，使用专用颈动脉探头，频率为5-12MHz。测定左右两侧颈动脉指标。研究对象平卧，头转向对侧，暴露需要检查的颈总动脉，在B超声下定位。测定项目：内膜中层厚度（IMT）：颈总动脉IMT和距离颈动脉窦口1 cm为检查点，测定IMT；如在颈部暴露的颈动脉可视范围内发现内膜中层明显增厚，则测量记录其为最厚IMT。

1.3 EPCs 检测

流式细胞仪检测EPCs受检者空腹取肘静脉血2 TIll于EDTA-K：抗凝管中，轻轻摇匀以充分抗凝，加入PBS缓冲液2 mL混匀，然后缓慢加入6 mL人淋巴细胞分离液中，室温下2 400 r/min离心 20 min，离心后吸取中间白膜层，经PBS缓冲液反复清洗，吹打混匀，室温重复离心，得到单个核细胞。取100 mL以分离洗涤好的单个核细胞用FITC标记的 抗体CDl33、CDM（Sigma公司）避光孵育10 min，同型抗体作阴性对照，加入0.5%BSA缓冲液混匀，室温1 500 r/min离心后加入0.5%BSA缓冲液充分混匀、过滤，流式细胞仪（BD公司）分析200 000个细胞。

1.4 排除标准

各组患有妊娠糖尿病，肝功能不全，感染性疾病，激素治疗，肾功能不全、甲状腺功能异常等均排除，对照组均无高血压、高血脂、心、肺、肝、肾、血液及内分泌系疾病。所有对象资料不全均剔除。

1.5 统计学分析

应用SPSS 17.0统计软件数据包，计量资料数据用x±s表示。三组间计量治疗如方差齐用单因素方差检验，两变量间相关性Spearman 相关系数，以P＜0.05为有统计学意义。

2 结果

2.1 临床资料比较

三组间年龄，FPG，2HPPG，FINS，PINS，HOMAIR，IMT，ECPs有明显的差异（P＜0.05），且糖尿病颈动脉硬化组FPG，2HPPG，FINS，PINS，HOMA-IR，IMT，均高于对照组和糖尿病组，EPCs明显低于对照组和糖尿病组。余年龄、BMI、甘油三酯（TG）、胆固醇（TC）、低密度脂蛋白（LDL）、高密度脂蛋白（HDL）均无明显差异（P＜0.05）。

2.2 胰岛素抵抗指数与内皮祖细胞指标之间比较

见表1，EPCs与HOMA呈负相关关系（r=-0.824，P＜0.01），在糖尿病颈动脉硬化组中，EPCs与IMT呈负相关关系（r=-0.718，P＜0.01）。

表1 直线相关分析结果

3 讨论

内皮祖细胞是骨髓的多功能干细胞，具有在一定条件下能分化出造血干细胞和内皮细胞的特性[1-2]，在成年人机体中参与血管再生，维持血管的完整性，并参与血管内皮修复，促进侧枝循环的建立和血管新生[3-4]。糖尿病动脉硬化疾病是发病早、进展快的慢性疾病。糖尿病动脉硬化疾病引起严重的心脑血管疾病并发症的发生，是糖尿病病死率和患病率主因之一。糖尿病血管病变的机制尚未阐明。近年来的研究发现，血管内皮依赖性舒张功能失调在明显的动脉粥样硬化形成之前就可以出现血管内皮功能异常是动脉粥样硬化的早期病理改变[5-6]，研究EPCs与糖尿病动脉硬化疾病的关系具有潜在而重要的临床意义。

本研究发现已发生颈动脉硬化的患者胰岛素抵抗高于未发生动脉硬化的入组人选，且糖耐量抵抗指数越高，血糖控制不佳，EPCs在外周数量越少，动脉硬化程度越严重。这可能是在糖尿病患者机体中，高胰岛素抵抗、高血糖引起的大量糖基化终末产物蓄积、脂质代谢紊乱、肾素一血管紧张素系统的激活、各种炎症因子及氧化应激等多因素干扰引起干扰调控EPCs 动员的信号减少，表达的 CXCR4和CD18 减少[7-9]，内皮细胞聚集和增值明显减弱；EPC表达CD14，CD64明显增高，分化为成熟内皮细胞能力障碍，导致内皮修复功能明显降低，粥样斑块破裂出现，从而导致动脉僵硬、狭窄甚至闭塞[10]。

研究EPCs进一步了解糖尿病外周动脉硬化的机制，胰岛素抵抗是影响内皮功能的重要因素之一。因其自身内皮生长修复和保持血管内皮完整的功能，应用EPCs治疗外周血管疾病，延迟动脉粥样硬化进展成为可能[11]。

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Characteristics of Endothelial Progenitor Cells in Patients with Diabetic Carotid Atherosclerosis

Ding Yi1，Yang Xin2
（1.Department of Endocrinology，Guilin People's Hospital，Guilin Guangxi 541002，China；2.Guilin People's Hospital，Department of critical care，Guilin Guangxi 541002，China）

Objective to explore the number’s differences and characteristics of endothelial progenitorcells（EPCs）of type 2 diabetes patients and diabetic patients with carotid atherosclerosis. Methods 32 healthy adults is a control group.104 patients diagnosed with diabetes，divided into DM group（56 examples）and diabetes with carotid atherosclerosis group（48 samples）divided by Doppler ultrasoundto measure. Blood samples are collected，glucose，insulin，triglycerides（TG），total cholesterol（TC），high densitylipoprotein（HDL-C），low densitylipoprotein（LDL-C），very low densitylipoprotein（VLDL-C）and so on. collected carotidintima-media thickness（IMT），and tested three group sofendothelial progenitorcells（EPCs）collected in diabetes with atherosclerosis group are analysised and comparisoned. Results EPC scarotid atherosclerosisin diabeticgroup，HOMAinsulin resistance indexwere higher thanDMgroup and control group，EPCsandIMT，HOMAinsulin resistancenegative correlation. Conclusion diabetes have an impact on endothelial function early，insulin resistanceis an important factoraffectingendothelial function.

diabetes；carotidatherosclerosis；endothelial progenitor cells

课题项目：广西壮族自治区卫生厅科研课题（编号：Z2013452）

丁毅，本科，副主任医师，主要研究方向：2型糖尿病及相关并发症。