张子荣，马长宾，崔 蕾，鲁立柱

（1.新疆建设兵团第六师五家渠市畜牧兽医工作站，五家渠 831300；2.天康生物股份有限责任公司，新疆 乌鲁木齐 830032）

羔羊小反刍兽疫母源抗体消长规律

张子荣1，马长宾1，崔 蕾1，鲁立柱2

（1.新疆建设兵团第六师五家渠市畜牧兽医工作站，五家渠 831300；2.天康生物股份有限责任公司，新疆 乌鲁木齐 830032）

为合理制定羔羊小反刍兽疫（PPR）的免疫程序，采用中和试验研究了羔羊母源抗体消长规律。结果表明：羔羊出生后7～45 d血清抗体水平较高（抗体效价≥1∶40血清比例均大于80%），抗体保护率达90%以上，其中7～14 d血清抗体水平最高（抗体效价≥1∶40血清比例均大于90%），抗体保护率达100%。14 d以后血清抗体水平开始降低，90 d时血清抗体保护率降到了60%。对于经免场PPR的最佳免疫时间应选择在断奶后30日龄左右，即60日龄断奶，90日龄免疫；90日龄断奶，120日龄免疫。

羔羊；PPR；母源抗体；消长规律

小反刍兽疫（PPR），又称羊瘟，是由PPR病毒（PPRV）引起的山羊、绵羊、野生小反刍兽的高度接触性传染病，以发热、口炎、腹泻、肺炎为特征［1］。易感羊群发病率可高达90%～100%，在严重情况下病死率高达100%［2］。目前，PPR无特效治疗药物，疫苗免疫接种是最有效的防控措施［3］。羔羊出生后通过吮吸母乳可以获得母源抗体。母源抗体的存在，可使羔羊在一定时间内被动地得到保护，但又给免疫接种带来影响。羔羊母源抗体水平过高，接种PPR疫苗，则疫苗会被母源抗体所中和，使羔羊不产生抗体或产生的抗体水平较低，得不到应有的保护；母源抗体过低时接种疫苗，则羔羊在免疫空白期易受环境中PPRV的侵袭。因此，研究羔羊小反刍兽疫母源抗体消长规律就显得很有必要。鉴此，本研究通过中和试验对羔羊血清PPR抗体水平进行了监测，分析羔羊PPRV母源抗体消长规律，以确定最佳首免时机，为合理制订小反刍兽疫免疫程序提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 供试羊 供试羊为第六师102团某羊场同期分娩的20只经产湖羊（配种前皮下注射1头份小反刍兽疫活疫苗）所产的22只羔羊，在48 d时，由于2只羔羊出现腹泻症状，将其移出试验羊群。

1.1.2 检测试剂 检验用抗原（抗原批号：20161000）由天康生物股份有限责任公司生产部生产，质检部标定；检验用阴、阳性标准血清由质检部制作、标定；Vero传代细胞，购自中国兽药监察所，由质检部保存。

1.2 方法

（1）将小反刍兽疫Clone9株病毒液用无血清MEM细胞培养液稀释成102.0 TCID50/0.1mL。

（2）将被检羊血清、阳性对照血清、阴性对照血清在56℃水浴灭能30min。

（3）将阴性血清用无血清MEM细胞培养液进行1∶2、1∶4、1∶8稀释，将被检羊血清和阳性对照血清先进行1∶5稀释，再进行2倍系列稀释，将各稀释度被检血清及阳性和阴性对照血清分别加入96孔细胞培养板，每个稀释度接种5孔，每孔0.1mL。

（4）同时设立病毒回归对照，即将100 TCID50/0.1mL病毒工作液用无血清MEM细胞培养液10倍系列稀释成10TCID50/0.1mL、1TCID50/0.1mL、0.1TCID50/0.1mL，取病毒工作液和3个稀释度病毒液，每个病毒液接种5孔，每孔0.1mL。

（5）向所有血清孔加入100 TCID50/0.1mL病毒工作液0.1mL，向细胞对照孔加入0.2mL无血清MEM细胞培养液，向病毒对照孔中加入0.1mL无血清MEM细胞培养液，37℃作用1 h。

（6）向所有孔加入浓度为20万～30万/mL的Vero细胞悬液0.1mL，置37℃、5%CO2培养箱培养6 d，期间每日观察细胞病变。

（7）试验结果判定：10 TCID50以上病毒对照及阴性血清对照孔均应出现小反刍兽疫病毒特有的细胞融合等细胞病变，1 TCID50病毒对照部分孔出现细胞病变，0.1 TCID50病毒对照、阳性血清对照1∶160稀释度以下细胞孔和细胞对照孔应不出现细胞病变。记录被检血清各稀释度细胞病变孔数，以5个试验孔均未出现细胞病变的血清最高稀释度为中和抗体效价。血清效价≥1∶10，判为抗体阳性。

2 结果与分析

2.1 羔羊小反刍兽疫母源抗体效价检测结果

从表1可以看出，羔羊出生后7～45 d血清抗体水平较高（抗体效价≥1∶40血清比例均大于80%），抗体保护率达90%以上，其中7～14 d血清抗体水平最高（抗体效价≥1∶40血清比例均大于90%），抗体保护率达100%。14 d以后血清抗体水平开始降低，90 d时血清抗体保护率降到了60%，特别是60 d后羔羊血清抗体水平下降较快，可能与该羊场羔羊在60日龄断奶有关。

表1 羔羊中和试验血清检测结果

2.2 羔羊小反刍兽疫母源抗体水平动态变化

如图1所示，羔羊吮乳后母源抗体平均效价逐渐升高，在14日龄时达到高峰，以后逐渐下降。如图2所示，羔羊母源抗体保护率7日龄时达到峰值（100%），14日龄以后开始缓慢下降，60日龄以后下降幅度较大，90日龄时已降至60%。

图1 羔羊小反刍兽疫母源抗体平均效价变化图

图2 羔羊小反刍兽疫母源抗体保护率变化图

3 讨论

OIE将PPR列为法定报告动物疫病，我国将其列为一类动物疫病，《国家中长期动物疫病防治规划（2012—2020年）》将其列为重点防范的13种外来动物疫病之一。PPR作为一种重大动物疫病，严重威胁我国的动物卫生安全和畜牧业的发展，为了有效预防、控制和消灭PPR，我国采用了大规模的免疫策略，而免疫方案及免疫评估的完善则是当前防控PPR的重要手段。

首免日龄的选择对免疫效果有着重要影响。徐雅萍等［4］的研究结果表明，湖羊在90日龄以后免疫PPR的效果明显优于90日龄之前。本研究结果显示，60日龄（断奶）后羔羊血清母源抗体水平下降较快，90日龄时血清抗体保护率降到了60%，说明断奶时间与母源抗体水平下降快慢有关。国内外相关报道显示，PPR母源抗体在羔羊3～4月龄下降到保护水平以下［5-6］。因此，本试验分析认为90日龄以前羔羊受母源抗体影响，母源抗体对疫苗抗原有部分中和作用，如果在羔羊PPR母源抗体水平较高的时候接种活疫苗，不但不能激发机体产生保护抗体，反而会使机体内抗体水平更低。所以，对于经免场PPR的最佳免疫时间应选择在断奶后30日龄（60日龄断奶，90日龄免疫；90日龄断奶，120日龄免疫）左右，过早很有可能会造成免疫失败，过晚则抗体空档期太长，增加感染风险。

评价PPR抗体保护力分群体和个体，群体用抗体保护率（≥70%）表示，个体用抗体效价（≥1∶10）表示。本试验结果表明，羔羊出生后7～45 d血清抗体水平较高（抗体效价≥1∶40血清比例均大于80%），抗体保护率达90%以上；羔羊出生后60 d时，抗体效价≥1∶40血清比例仅为50%（10/20），抗体保护率85%；羔羊出生后90 d时，抗体效价≤1∶10血清比例上升为40%（8/20），而抗体效价≥1∶40血清比例降为0%，抗体保护率降至60%。说明中和试验抗体效价高低与群体抗体保护率呈正比。

综上所述，羔羊PPR免疫日龄应根据羔羊母源抗体的消长规律及抗体监测结果确定。在羔羊母源抗体降低到保护的最低临界值（抗体效价在1∶10时;群体保护率在70%以下）时进行首免是合理的，这样，既能避免母源抗体的干扰，又能避免出现免疫空白期。

［1］ 李景玉，高玉竹，李元果，等.小反刍兽疫研究进展［J］.中国畜牧兽医，2014，41（10）：274-279.

［2］ 宋建德，袁丽萍，刘陆世，等.全球小反刍兽疫流行状况和防控策略［J］.中国动物检疫，2015，32（7）：8-12.

［3］ 信爱国，杨仁标，向文彬.小反刍兽疫研究进展［J］.中国预防兽医学报，2003，25（2）：152-154.

［4］ 徐雅萍，邱寒峰，俞乾挺，等.小反刍兽疫疫苗对不同日龄湖羊的免疫效果研究［J］.中国预防兽医学报，2016，38（8）：646-648.

［5］ Bodjo SC，Couacyhymann E，KoffiM Y，et al.Assessmentof the duration ofmaternal antibodies specific to the homologous peste des petits ruminant vaccine“Nigeria 75/1”in Djallonkélambs［J］. Biokemistri，2006，18（2）：99-103.

［6］ Balamurugan V，Sen A，Venkatesan G，etal.Study on passive immunity：Time of vaccination in kids born to goats vaccinated against Peste despetits ruminants［J］.Virol Sin，2012，27（4）：228-233.

S826.7

A

2095-3887（2017）04-0043-03

10.3969/j.issn.2095-3887.2017.04.012

2017-04-19

2015年农六师五家渠市科技计划和重大科技专项计划项目（1515号）

张子荣（1980-），男，兽医师，本科，主要从事动物疫病监测与防治研究。

马长宾（1982-），男，兽医师，硕士，主要从事动物疫病监测与防治研究。