刘旭朝，刘金欣，孙伟，宋经元，石林春，孙稚颖

（1.山东中医药大学药学院济南250355；2.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所/中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193；3.承德医学院/河北省中药研究与开发重点实验室承德067000；4.中国中医科学院中药研究所/中药鉴定与安全性检测评估北京市重点实验室北京100700）

动物药材DNA提取方法优化和市售药材DNA条形码鉴定研究＊

刘旭朝1，2，刘金欣2,3，孙伟4，宋经元2，石林春2，孙稚颖1＊＊

（1.山东中医药大学药学院济南250355；2.中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所/中草药物质基础与资源利用教育部重点实验室北京100193；3.承德医学院/河北省中药研究与开发重点实验室承德067000；4.中国中医科学院中药研究所/中药鉴定与安全性检测评估北京市重点实验室北京100700）

目的：对动物药材DNA提取方法进行优化，利用优化方法提取市售动物药材DNA并进行DNA条形码鉴定。方法：基于SDS法DNA提取原理，比较裂解液中不同EDTA浓度（0.025、0.25、0.5 mol·L-1）、是否含NaCl和Triton X-100等因素对不同用药部位动物药材DNA提取质量的影响，筛选得到最佳裂解液配方；使用优化的裂解液配方提取121份市售动物药材DNA并进行基原物种鉴定。结果：裂解液配方为1%SDS、0.03 mol·L-1Tris-HCl、0.25 mol·L-1EDTA、0.2 mol·L-1NaCl对不同用药部位动物药材DNA提取效果最佳，并可实现对蝉蜕等提取困难样本DNA的提取；利用优化裂解液提取的121份市售动物药材DNA满足中药材分子鉴定后续实验要求，所有市售动物药材均可准确鉴定到基原物种。结论：本研究优化的裂解液配方可用于除壳类、分泌物类、加工品外不同用药部位动物药材的DNA提取，为动物药材分子鉴定提供了技术支持。……