代 蕊， 刘 春 莹， 徐 龙 权， 林 完 泽， 鱼 红 闪

( 1.大连工业大学 生物工程学院， 辽宁 大连 116034；2.韩京国立大学 生命科学学院， 京畿道 安城 456-749 )

白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶的分离纯化及酶性质

代 蕊1， 刘 春 莹1， 徐 龙 权1， 林 完 泽2， 鱼 红 闪1

( 1.大连工业大学 生物工程学院， 辽宁 大连 116034；2.韩京国立大学 生命科学学院， 京畿道 安城 456-749 )

对Absidiasp. P39r所产白头翁皂苷糖基水解Ⅱ型酶(PSGaseⅡ)进行分离纯化，得到电泳纯酶蛋白，对其酶学性质以及该酶对底物的催化反应过程进行了研究。结果表明，该酶蛋白的分子质量为56 ku，最适反应pH为4.0，在pH 3.0～7.0酶活力稳定；最适反应温度为40 ℃，在20～40 ℃酶活力稳定；金属离子Na+、K+、Mg2+对酶反应无显著影响，而Fe3+、Cu2+、Zn2+对其有较强的抑制作用。酶反应动力学参数Km为19.60 mmol/L，vmax为21.60 mmol/(L·h)。PSGaseⅡ对白头翁皂苷PSⅠ的催化反应过程结果表明反应是分步进行的，PSGaseⅡ以白头翁皂苷PSⅠ为底物，先催化降解为中间产物白头翁皂苷PSⅡ，继续催化反应，最终生成白头翁皂苷A。

白头翁皂苷；水解酶；酶性质

0 引 言

白头翁具有清热解毒、燥湿杀虫等功效[1]，近年来，其增强系统免疫及抗肿瘤作用成为研究热点[2]。对白头翁的成分研究最多的是白头翁皂苷，其为白头翁的主要化学成分[3]，天然存在的白头翁皂苷大多含有多个糖基[4]，进入人体后需要被肠道内微生物转化为低糖基皂苷后可被人体吸收利用，若在体外实现这一过程，可提高皂苷的生物活性和利用度[5]。研究表明，生物酶法相对于化学法水解糖基更加温和，加之选择性较高，副产物少，成为主要的转化方法[6]。

目前，对于白头翁皂苷的研究主要集中在抗菌、抗阿米巴原虫、抗其他病原体等药理学方面[7-9],对白头翁皂苷糖基水解酶水解多糖基皂苷的研究较少。……