陈娟 谢丽华 李生强 许惠娟 陈赛楠 叶云金 葛继荣

福建省中医药研究院骨质疏松证候基因组学重点研究室，福建 福州 350003

绝经后骨质疏松症(postmenopausal osteoporosis，POP)是中老年女性的常见多发病，以骨量低下、骨微结构破坏，导致骨脆性增加、易发生骨折为特征的全身性骨病，其发生与遗传、内分泌和免疫等因素密切相关[1]。miRNAs是一类内源性、长度约19～26个核苷酸的非编码短小RNA，对骨代谢和骨的发育重建起着重要作用[2]。课题组前期研究发现，hsa-miR-655通过靶向结合CLCF1 mRNA的3'UTR区，在转录后水平负性调控绝经后骨质疏松症关联基因CLCF1的表达[3]，但hsa-miR-655介导CLCF1基因参与POP的具体机制尚不清楚。

CLCF1是B淋巴细胞的催化剂，可刺激B细胞活化，参与体液免疫[4]。“骨免疫学”理论认为，骨骼系统与免疫系统之间存在密切关系，免疫失调可导致骨代谢异常[5]。OPG/RANKL/RANK 系统作为连接骨代谢与免疫系统之间的桥梁，是调节骨重建的一类重要的信号通路。本研究通过在人成骨肉瘤MG63细胞系中过表达hsa-miR-655，研究hsa-miR-655通过靶向调控CLCF1基因表达，对细胞增殖和骨免疫重要通路OPG/RANKL/RANK系统的影响。

1 材料与方法

1.1 试剂与仪器

人成骨肉瘤细胞 MG63(中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心)；MEM培养基(GIBCO公司)；胎牛血清(fetal bovine serum，FBS，GIBCO公司)；青链霉素(Invitrogen公司)；hsa-miR-655表达慢病毒(上海吉凯基因化学技术有限公司，货号MI0003677)；hsa-miR-655引物、U6引物(广州市锐博生物科技有限公司)；microRNA提取试剂盒(Qiagen公司)；miRNA反转录试剂盒、miRNA定量试剂盒(广州市锐博生物科技有限公司)；Trizol试剂(Invitrogen公司)；PrimeScript 逆转录试剂盒(Fermentas公司)；CLCF1、OPG、RANKL引物(宝生物工程有限公司)；……