杜 芳,刘 伟,刘 敏,刘 芳,王晓红

·论 著·

原代乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤模型的构建

杜 芳1,刘 伟1,刘 敏1,刘 芳1,王晓红2

目的 构建体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型。方法 原代乳鼠心肌细胞培养至第5天进行干预，缺氧过程(H)将细胞置入1% O2、5% CO2、37 ℃三气培养箱内无糖无血清依次培养1、2、3、4 h，再复氧过程(R)更换含10%胎牛血清低糖DMEM正常培养6 h。将细胞共分5组：正常对照组，H1R6组，H2R6组，H3R6组，H4R6组。观察C组和各H/R组再复氧6 h时心肌细胞一般形态和超微结构，用CCK-8法检测细胞增殖情况，乳酸-丙酮酸法测定乳酸脱氢酶(LDH)活性，流式细胞仪检测细胞早期凋亡率。结果 与C组比较，各H/R组心肌细胞一般形态及超微结构损伤明显,随缺氧缺糖时间延长，其损伤逐渐加重；与C组比较，各H/R组细胞增殖减少，培养液LDH活性升高(P<0.05),随缺氧时间延长，细胞增殖逐渐减少(P<0.05)，培养液LDH活性逐渐升高(P<0.05)；与C组比较，各H/R组细胞早期凋亡率明显增加(P<0.05)，且随缺氧时间延长，凋亡率逐渐升高(P<0.05)。结论 成功建立乳鼠心肌细胞H/R损伤模型，该模型可靠稳定，重复性好，且缺氧时间以3 h为宜。

心肌细胞；缺氧；复氧；无糖；缺血-再灌注；损伤

近年来心血管疾病发病率逐渐升高，随着冠脉搭桥术、血管成形术、体外循环术、心脏移植术等的推广应用，心肌缺血-再灌注损伤现象越来越受到临床关注。因此，建立心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤模型对于在离体水平下研究心肌缺血-再灌注发生的机制具有重要意义[1]。目前已知的细胞缺氧方法很多，单纯性物理法和化学法制造的缺氧环境不稳定，O2浓度和缺氧时间不易控制，无法建立稳定可靠的H/R模型[2-3]，实验重复性较差，研究结果不具说服力[3-4]。本研究拟体外原代培养乳鼠心肌细胞，采用物理性缺氧(1% O2)，同时更换无糖DMEM培养基培养的方法，模拟缺血过程，恢复糖氧供给模拟再灌注过程，通过观察细胞一般形态和超微结构、细胞损伤酶活性以及细胞凋亡率，以期建立一种稳定可靠的体外心肌细胞缺血-再灌注损伤(MIRI)模型。……